1.樣本的準(zhǔn)備：盡量使用新鮮樣本,，不使用有溶血，被細(xì)菌污染,、標(biāo)本保存時間過長和標(biāo)本凝固不全的樣本,。ELISA檢測宜采集新鮮標(biāo)本，如不能立即測定,，5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存,，對于1周后檢測的樣本應(yīng)低溫凍存；做好分裝,，長時間凍存的樣本避免反復(fù)凍融,。
2.仔細(xì)閱讀說明書，熟悉整個流程,，推薦畫出簡要步驟圖,；提前準(zhǔn)備試劑，比如常見20X洗滌液是濃縮液,，需要用超純水提前稀釋準(zhǔn)備好,。一般的檢測抗體和酶標(biāo)二抗需要用對應(yīng)的稀釋液稀釋至工作濃度。
3.不同批次的試劑不要混用,，檢查各組分的有效期,。
4.預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度,，預(yù)防后續(xù)實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分,，而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5.待測樣本加樣：待檢樣本過多時,，建議分批操作,；需要稀釋的樣本提前做好稀釋,，注意選對合適稀釋液；控制好加樣時間,，避免加樣費時過長造成誤差,；注意加樣角度，垂直加入孔底,，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭,，防止交叉污染。
6.溫育和洗板：溫育時間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行選擇,。溫育時可以采用水浴或者濕盒孵育,避免“邊緣效應(yīng)",。①手工洗板時，拍板時要垂直,，避免交叉污染,，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離,；②洗板機洗板時應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,。
7.顯色：市售ELISA 試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液,，反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15～30 min,。顯色反應(yīng)需要避光。
8.讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析：終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成,，讀取OD值時酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15～30 min再進(jìn)行,。數(shù)據(jù)分析一般用四參數(shù)和直線擬合法，選擇哪種擬合方式,，可以依據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)（R2）來確定,，R2一般需要大于0.99。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
2
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)