真核細胞通常懸浮在帶有血清和冷凍劑的培養(yǎng)基內,保存在-196°C 的液氮中。如果是商業(yè)訂購的,,通常儲存在用干冰包裹
的凍存管中,。所以凍存后的細胞必須快速解凍后立即培養(yǎng),以獲得最大的生存能力,,為了除去凍存時的添加劑,,
24 小時后要更換培養(yǎng)基。
一,、材料
培養(yǎng)基,, 37’C 預熱
培養(yǎng)瓶
裝有70 %乙醇的燒杯
1ml 、10ml 的移液管,、移液器及移液頭
二,、步驟
把凍存細胞的管子在37’C 的水浴融化,快速搖動,, 1分鐘內使管內的細胞融化,。
把融化的管子浸入裝有70 %乙醇的燒杯內,整個實驗在超凈臺內進行,。
小心打開凍存管,,不要讓乙醇浸入管內。
將凍存管內的細胞轉移到培養(yǎng)瓶中,,并立即加入預熱的培養(yǎng)基,。
蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,培養(yǎng)24 小時,。
用新培養(yǎng)基替換老培養(yǎng)基,。
繼續(xù)培養(yǎng)2~3 天或按說明書上的建議進行操作。
三,、溫馨提示
1.融解的細胞必須馬上培養(yǎng),,如果來不及培養(yǎng),就保存在液氮中,。
2.細胞通常凍存為1 ml 的體積,,加入新的培養(yǎng)基至10ml 。
3.可以在融化了凍存細胞后,,把細胞離心下來,,并用新鮮的培養(yǎng)基重新懸浮細胞,這種做法只適用于那些對凍存劑敏感的細胞,,或者笫二天因為有事不能更換新培養(yǎng)基的情況,。
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