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細(xì)胞復(fù)蘇過程

閱讀:707      發(fā)布時(shí)間:2024-7-1
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真核細(xì)胞通常懸浮在帶有血清和冷凍劑的培養(yǎng)基內(nèi),,保存在-196°C 的液氮中,。如果是商業(yè)訂購的,通常儲(chǔ)存在用干冰包裹

的凍存管中,。所以凍存后的細(xì)胞必須快速解凍后立即培養(yǎng),,以獲得最大的生存能力,為了除去凍存時(shí)的添加劑,, 

24 小時(shí)后要更換培養(yǎng)基,。


一、材料


培養(yǎng)基,, 37’C 預(yù)熱

培養(yǎng)瓶

裝有70 %乙醇的燒杯

1ml ,、10ml 的移液管、移液器及移液頭

二,、步驟


把凍存細(xì)胞的管子在37’C 的水浴融化,,快速搖動(dòng), 1分鐘內(nèi)使管內(nèi)的細(xì)胞融化,。

把融化的管子浸入裝有70 %乙醇的燒杯內(nèi),,整個(gè)實(shí)驗(yàn)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

小心打開凍存管,,不要讓乙醇浸入管內(nèi),。

將凍存管內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中,并立即加入預(yù)熱的培養(yǎng)基,。

蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,,培養(yǎng)24 小時(shí)。

用新培養(yǎng)基替換老培養(yǎng)基,。

繼續(xù)培養(yǎng)2~3 天或按說明書上的建議進(jìn)行操作,。

三、溫馨提示


1.融解的細(xì)胞必須馬上培養(yǎng),,如果來不及培養(yǎng),,就保存在液氮中。


2.細(xì)胞通常凍存為1 ml 的體積,加入新的培養(yǎng)基至10ml ,。


3.可以在融化了凍存細(xì)胞后,,把細(xì)胞離心下來,并用新鮮的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞,,這種做法只適用于那些對(duì)凍存劑敏感的細(xì)胞,,或者笫二天因?yàn)橛惺虏荒芨鼡Q新培養(yǎng)基的情況。


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