真核細(xì)胞通常懸浮在帶有血清和冷凍劑的培養(yǎng)基內(nèi),,保存在-196°C 的液氮中,。如果是商業(yè)訂購的,通常儲存在用干冰包裹
的凍存管中,。所以凍存后的細(xì)胞必須快速解凍后立即培養(yǎng),,以獲得最大的生存能力,為了除去凍存時的添加劑,,
24 小時后要更換培養(yǎng)基,。
一、材料
培養(yǎng)基,, 37’C 預(yù)熱
培養(yǎng)瓶
裝有70 %乙醇的燒杯
1ml ,、10ml 的移液管、移液器及移液頭
二,、步驟
把凍存細(xì)胞的管子在37’C 的水浴融化,,快速搖動, 1分鐘內(nèi)使管內(nèi)的細(xì)胞融化,。
把融化的管子浸入裝有70 %乙醇的燒杯內(nèi),,整個實驗在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。
小心打開凍存管,,不要讓乙醇浸入管內(nèi),。
將凍存管內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中,,并立即加入預(yù)熱的培養(yǎng)基。
蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,,培養(yǎng)24 小時,。
用新培養(yǎng)基替換老培養(yǎng)基。
繼續(xù)培養(yǎng)2~3 天或按說明書上的建議進(jìn)行操作,。
三,、溫馨提示
1.融解的細(xì)胞必須馬上培養(yǎng),如果來不及培養(yǎng),,就保存在液氮中,。
2.細(xì)胞通常凍存為1 ml 的體積,加入新的培養(yǎng)基至10ml ,。
3.可以在融化了凍存細(xì)胞后,,把細(xì)胞離心下來,并用新鮮的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞,,這種做法只適用于那些對凍存劑敏感的細(xì)胞,,或者笫二天因為有事不能更換新培養(yǎng)基的情況。
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