羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)
一,、產(chǎn)品簡介:
在生命活動的代謝過程中不斷產(chǎn)生各種自由基,,其中羥自由基·OH是體內(nèi)的活性氧,可介導(dǎo)許多生理變化,,羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì),、核酸、脂類等生物分子,,造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損,,進而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病,,如引發(fā)不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),,并損傷膜結(jié)構(gòu)和功能。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一,,在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用,。
雅吉生物羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)又稱羥自由基清除能力檢測試劑盒或羥自由基檢測試劑盒,其檢測原理是H2O2/Fe2+ 通過 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,,并將Fe2+氧化為Fe3+,,導(dǎo)致紅色的鄰二氮菲-Fe2+氧化為無色的鄰二氮菲-Fe3+,使鄰二氮菲-Fe2+在536nm處的最大吸收峰消失,,可通過酶標(biāo)儀測定530~540nm處吸光度的變化,,據(jù)此可計算出羥自由基的含量變化,即可計算出樣品的羥自由基清除率或清除能力,。該試劑盒主要用于植物組織,、血清、血漿等樣本,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,,不宜用于臨床診斷或其他用途,。
二、產(chǎn)品組成:
名稱規(guī)格 | 100T | 存儲 |
試劑(A): 鄰二氮菲溶液 | 15ml | 4℃ |
試劑(B): OH Assay buffer | 20ml | RT |
試劑(C): 亞鐵顯色液 | 10ml | 4℃ |
試劑(D): 氧化劑 | 10ml | 4℃ |
使用說明書 | 一份 |
三,、自備材料:
1,、蒸餾水
2、實驗材料:植物組織(芹菜,、綠豆,、玉米等葉片)、血液,、組織樣本等
3,、研缽或勻漿器
4、離心機,、離心管或試管
5,、水浴鍋
6、酶標(biāo)儀,、96 孔板
四,、操作步驟(僅供參考):
1、準(zhǔn)備樣品:
①植物樣品:取正?;蚰婢诚碌男迈r植物組織,,清洗干凈,擦干,,切碎,,迅速稱取,按1~1.5g 樣品:4.5ml 蒸餾水的比例勻漿或研磨,,室溫靜置 4h,,3000g 離心 30min,上清液即為羥自由基粗提液,,4℃保存?zhèn)溆谩?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)
②血漿,、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,,4℃保存,,用于羥自由基的檢測。
③高活性樣品:如果樣品中含有較高濃度的羥自由基,,可用蒸餾水進行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2,、·OH加樣:按照下表設(shè)置空白管、未損傷管,、損傷管,、對照管、測定管,,溶液應(yīng)按照順序依次加入,,然后,,置各管于 37℃水浴鍋保溫 1h。如果樣品中的羥自由基(·OH)濃度過高,,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進行測定,,樣品的檢測最好能設(shè)置平行管。
加入物(ml) | 空白管 | 未損傷管 | 損傷管 | 對照管 | 測定管 |
鄰二氮菲溶液 | — | 0.15 | 0.15 | — | 0.15 |
OH Assay buffer | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
亞鐵顯色液 | — | 0.1 | 0.1 | — | 0.1 |
蒸餾水 | 0.8 | 0.55 | 0.45 | 0.7 | 0.35 |
待測樣品 | — | — | — | 0.1 | 0.1 |
氧化劑 | — | — | 0.1 | — | 0.1 |
3,、·OH 測定:取96孔板,,將各管溶液依次吸取300ul加至96孔板中,用酶標(biāo)儀檢測530~540nm處各孔吸光度值,,依次記為A0,、A1、A2,、A3`,、A3。
五,、計算:
組織樣品·OH 清除率(%)=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/[ (A1- A0)-( A2- A0)]×100
=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/(A1-A2)×100
備注:A0=空白管的吸光度值
A1=未損傷管的吸光度值
A2=損傷管的吸光度值
A3`=對照管的吸光度值
A3=測定管的吸光度值
六,、注意事項:
1、 實驗材料應(yīng)盡量新鮮,,如取材后不能立即檢測,,應(yīng)存于 4℃。
2,、 測定過程中的干擾因素較多,,容易對測定的準(zhǔn)確性和靈敏度造成影響。
3,、 水浴的溫度和時間應(yīng)一致,。
4、 如果沒有分光光度計,,也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定,,但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測體積,。
5,、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
七,、有效期:6 個月有效。4℃運輸,,4℃保存,。
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