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羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)

一,、產(chǎn)品簡介：

在生命活動(dòng)的代謝過程中不斷產(chǎn)生各種自由基，其中羥自由基·OH是體內(nèi)的活性氧,，可介導(dǎo)許多生理變化,，羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸,、脂類等生物分子,，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病，如引發(fā)不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng),，并損傷膜結(jié)構(gòu)和功能,。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用,。

雅吉生物羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)又稱羥自由基清除能力檢測試劑盒或羥自由基檢測試劑盒,，其檢測原理是H2O2/Fe2+ 通過 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，并將Fe2+氧化為Fe3+,，導(dǎo)致紅色的鄰二氮菲-Fe2+氧化為無色的鄰二氮菲-Fe3+,，使鄰二氮菲-Fe2+在536nm處的最大吸收峰消失，可通過酶標(biāo)儀測定530~540nm處吸光度的變化,，據(jù)此可計(jì)算出羥自由基的含量變化,，即可計(jì)算出樣品的羥自由基清除率或清除能力。該試劑盒主要用于植物組織,、血清,、血漿等樣本。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

二、產(chǎn)品組成：

三,、自備材料：

1,、蒸餾水

2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(芹菜,、綠豆,、玉米等葉片)、血液,、組織樣本等

3,、研缽或勻漿器

4、離心機(jī),、離心管或試管

5,、水浴鍋

6、酶標(biāo)儀,、96 孔板

四,、操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正?；蚰婢诚碌男迈r植物組織,，清洗干凈，擦干,，切碎,，迅速稱取,，按1~1.5g 樣品：4.5ml 蒸餾水的比例勻漿或研磨，室溫靜置 4h,，3000g 離心 30min,，上清液即為羥自由基粗提液，4℃保存?zhèn)溆谩?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)

②血漿,、血清和尿液樣品：血漿,、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存,，用于羥自由基的檢測,。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的羥自由基，可用蒸餾水進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2,、·OH加樣：按照下表設(shè)置空白管,、未損傷管、損傷管,、對照管、測定管,，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，然后，置各管于 37℃水浴鍋保溫 1h,。如果樣品中的羥自由基(·OH)濃度過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置平行管,。

3,、·OH 測定：取96孔板，將各管溶液依次吸取300ul加至96孔板中,，用酶標(biāo)儀檢測530~540nm處各孔吸光度值,，依次記為A0、A1,、A2,、A3`、A3,。

五,、計(jì)算：

組織樣品·OH 清除率(%)=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/[ (A1- A0)-( A2- A0)]×100

=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/(A1-A2)×100

備注：A0=空白管的吸光度值

A1=未損傷管的吸光度值

A2=損傷管的吸光度值

A3`=對照管的吸光度值

A3=測定管的吸光度值

六、注意事項(xiàng)：

1,、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,，如取材后不能立即檢測，應(yīng)存于 4℃,。

2,、 測定過程中的干擾因素較多,，容易對測定的準(zhǔn)確性和靈敏度造成影響。

3,、 水浴的溫度和時(shí)間應(yīng)一致,。

4、 如果沒有分光光度計(jì),，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定,，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測體積。 

5,、 為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

七,、有效期：6 個(gè)月有效,。4℃運(yùn)輸，4℃保存,。