本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷
人張力蛋白4(TNS4)ELISA試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被腺病毒7型IgM抗原的包被微孔中,，依次加入標本、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中人腺病毒7型IgM抗體（ADV-7-IgM）的存在與否,。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清,。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結晶溶解后再使用。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。
預處理后的樣本無需稀釋,，直接取50μL加樣即可。
嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。
所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法
手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。
自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。
操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設置陰,、陽性對照孔和樣本孔,，陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照各50μL,；
待測樣本孔加待測樣本50μL；
隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
每孔加入終止液50μL，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
結果判斷
1. 試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；
陰性對照孔OD值平均值≤0.15。
2. 臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性
4. 陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性
試劑盒性能
準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15,，說明試驗結果有效。
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。
重復性：板內,、板間變異系數(shù)均小于15%。
貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
有效期：6個月
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