植物根系活力檢測(cè)試劑盒(TTC 比色法)
一,、產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
植物根系是活躍的吸收器官和合成器官,,根的生長(zhǎng)情況和代謝水平即根系活力將直接影響植物地上部分的生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)狀況以及最終產(chǎn)量,是植物生長(zhǎng)的重要生理指標(biāo)之一,。
TTC(2,,3,5-氯化三苯基四氮唑)是一種氧化還原物質(zhì),是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV 的氧化還原色素,,溶解于水為無(wú)色,,但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF),TTF比較穩(wěn)定,,不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化,,所以TTC 常被用作酶試驗(yàn)的氫受體。
植物根系活力檢測(cè)試劑盒(TTC比色法),,又稱作植物根系脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒,,其檢測(cè)原理是當(dāng)測(cè)定植物根系活力時(shí),以TTC為底物,,保溫1~4小時(shí),,根系中脫氫酶能夠還原TTC并生成不溶于水的紅色TTF,再用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或丙酮等)將其從根中提取出來(lái),,用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀檢測(cè)485nm處吸光度,,進(jìn)而計(jì)算出TTC 的還原量,,以該還原量表示脫氫酶活性,,并作為植物根系活力的指標(biāo)。該試劑盒主要用于定量測(cè)定植物的根系活力或脫氫酶活性,。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,,不宜用于臨床診斷或其他用途。
二,、產(chǎn)品組成:
名稱規(guī)格 | 50T | 存儲(chǔ) |
試劑(A): TTC | 1g | RT 避 光 |
試劑(B): TTC Assay buffer | 250ml | RT |
試劑(C): TTC 終止液 | 100ml | RT |
試劑(D): Na2S2O4 粉末 | 0.1g | RT |
使用說(shuō)明書 | 一份 |
三,、自備材料:
1、蒸餾水,、乙酸乙酯
2,、離心管或容量瓶、濾紙
3,、恒溫箱或水浴鍋,、研缽或勻漿器
4、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀,、比色杯或 96 孔板
四,、操作步驟(僅供參考):
1、配制TTC溶液(0.4%):稱取0.4gTTC溶解于100ml蒸餾水即成,,配制成溶液后應(yīng)4℃避光保存,,若變紅應(yīng)棄用。
2,、配制TTC Assay buffer工作液:將TTC溶液(0.4%)與TTC Assay buffer 等比例混合即成,,建議現(xiàn)用現(xiàn)配,4℃避光保存,若變紅應(yīng)棄用,。
3,、配制TTF標(biāo)準(zhǔn)工作液:取0.25mlTTC溶液(0.4%)置于10ml離心管或容量瓶,加入少許Na2S2O4粉末(一般2mg左右),,混勻,,產(chǎn)生紅色的不溶于水的紅色顆粒物TTF,加10ml乙酸乙酯,,充分混合溶解顆粒,,靜置分層(下層0.25ml為無(wú)色
水層,不可用),,上層紅色溶液中TTF濃度為100μg/ml,。
按下表分別移取上層紅色溶液0.25、0.5,、1,、1.5、2ml置于離心管或容量瓶中,,用乙酸乙酯補(bǔ)加至10ml,,即獲得TTF系列標(biāo)準(zhǔn)管。
加入物(ml) | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
TTF 標(biāo)準(zhǔn)工作液 | 0 | 0.25 | 0.5 | 1 | 1.5 | 2 |
乙酸乙酯 | 10 | 9.75 | 9.5 | 9 | 8.5 | 8 |
相當(dāng)于 TTF 含量(μg) | 0 | 25 | 50 | 100 | 150 | 200 |
4,、準(zhǔn)備樣品:取0.2~0.5g植物須根系,,洗凈,用濾紙吸干,,浸沒于TTC Assay buffer工作液中,,37℃避光孵育1~3h,加入2ml TTC終止液終止反應(yīng),。同時(shí)做一空白對(duì)照實(shí)驗(yàn),,即根系先浸沒于2ml TTC終止液以殺死根樣,再加入10ml TTC Assay buffer工作液,,37℃避光孵育1~3h,。
5、提取:分別將上述實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組的根系取出,,濾紙吸干水分,,放入研缽或勻漿器中,加入3~4ml乙酸乙酯,,充分研磨或勻漿,,以提取出TTF。把紅色提取液(TTF)轉(zhuǎn)移至離心管,,并用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈?~3次,,再將洗滌液一并轉(zhuǎn)移至離心管,最后補(bǔ)加乙酸乙酯至10ml,搖勻,。
6,、測(cè)定:比色杯光徑1.0cm,系列標(biāo)準(zhǔn)管以“0"號(hào)管調(diào)零,,測(cè)定1~5號(hào)管485nm的吸光度值,;樣品管以空白對(duì)照組樣品提取液做參比,調(diào)零,,以分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定實(shí)驗(yàn)組樣品提取液在 485nm 的吸光度值,。
五、計(jì)算:
以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液TTF含量(25,、50,、100、150,、200μg)為橫坐標(biāo),,以對(duì)應(yīng)吸光度為縱坐標(biāo),繪制TTF標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)回歸方程計(jì)算待測(cè)樣品的TTF含量或TTC還原量(μg),,即為根系活力或脫氫酶活性。
根系(脫氫酶)活力[mg/(g·h)]=m/(1000×W×t)
式中:
m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品提取液TTF 含量(μg)= TTC 還原量(μg)
W=植物須根系的重量(g)
t=孵育時(shí)間(h)
六,、注意事項(xiàng):
1,、配制好的TTC溶液(0.4%)和TTC Assay buffer工作液應(yīng)避光保存,,若變紅應(yīng)棄用,。
2、根系種類不同,,取樣量可有不同,。
3、根系應(yīng)吸干水分但不能擠壓傷及細(xì)胞,,才能測(cè)定準(zhǔn)確,。
4、提取用的研缽或勻漿器,、試管,、比色皿均應(yīng)保持干燥,沒有水分,。
5,、由于本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或丙酮)提取TTF,因此不能用一次性塑料比色皿或者酶標(biāo)條進(jìn)行檢測(cè),。建議用石英比色皿或玻璃比色皿檢測(cè),,檢測(cè)完成后用乙醇清洗并用水沖洗干燥即可。
6、如果沒有分光光度計(jì),,也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定,,但應(yīng)注意酶標(biāo)板每孔檢測(cè)體積。
7,、為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
七,、有效期:12 個(gè)月有效,。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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