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怎樣才能把細(xì)胞鋪板鋪得均勻呢?
1,、一般96孔板每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再,,繼續(xù)加剩余的半邊板子,,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,,右手輕輕敲擊板的右邊緣,,注意把握力度(一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),,依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱,。2,、細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,,對著燈光,,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán),。然后從底部敲擊,,使之分散。3,、如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,,建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯,,就是振幅小,,頻率高的那種。4,、細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài),。離心后,要充分懸??!還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,是要晃得,!晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,就會不均勻,!5,、一瓶細(xì)胞長滿后,正常處理,,在培養(yǎng)瓶里吹勻,,然后鋪6孔板,,每孔2毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,,然后放到培養(yǎng)箱里,,輕微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈?;旧?4小時(shí)之后觀察 每孔的細(xì)胞都會很均勻,。6、計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,,混勻后,,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,,顯微鏡下觀察,,如果不均勻,按上述方法再晃,。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話,,在種六孔板的過程中,隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子,,瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈,。7、放在水平板面上先上下移動,,再左右移動,,每個(gè)方向5到6次,但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中,,不要再做過多的運(yùn)動,,例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去了,。
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