elisa操作好能手都需要知道這些

時間：2024/1/25閱讀：1154

Elisa實驗是一種敏感性高，特異性強,，重復(fù)性好的實驗診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,，操作簡便,，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中,。

咱們就來談?wù)凟LISA試劑盒需把握的關(guān)鍵有哪些技巧,？

1.小心汲取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時刻和溫度。請注意在汲取標(biāo)本/規(guī)范品,，酶結(jié)合物或底物時,，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時刻距離假如太大，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時刻,，然后明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。

2.在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染,，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致呈現(xiàn)錯誤的結(jié)果,。

3.濃洗滌液會有鹽分出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。

4.試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃,，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),。

5.剛敞開的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會對試驗結(jié)果造成任何影響,。

6.一切的樣品都應(yīng)管理好，依照規(guī)則的程序處理樣品和檢測設(shè)備,。

我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,，如血漿、血清,、尿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的,。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的第一步,，下面簡單介紹一下細(xì)胞裂解液樣本及組織勻漿樣本的正確采集、處理方法,。

細(xì)胞裂解液：

1.吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來,。懸浮細(xì)胞可省略,。

2.收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基,，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3.加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸,。

4.將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍,，再放室溫解凍樣品,，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解,。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,，以達(dá)到裂解的目的,。

5.4℃10000×g 離心10min,，除去細(xì)胞碎片,，取上清，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。

組織勻漿液：

1.將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì),。

2.將組織塊稱重,，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小,，便于勻漿得更充分,。

3.將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中,。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿,，例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）,。

4.吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5~10min,，取上清,，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融,。

注意：保證樣本不含NaN3,，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果,。

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