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PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫,,它是利用DNA聚合酶在短時間內(nèi)將目標(biāo)DNA序列從一個拷貝擴(kuò)增到數(shù)百萬個拷貝的一種方法,。具體而言,將下述1~3的一系列反應(yīng)稱為“循環(huán)",,通過重復(fù)25~35個循環(huán),,以指數(shù)方式合成目標(biāo)DNA的拷貝。
變性:加熱雙鏈DNA模板以分離DNA鏈
退火:將稱為引物的短 DNA 分子附著到目標(biāo) DNA 的相鄰區(qū)域
延伸:DNA 聚合酶合成模板的互補(bǔ)鏈,,從每個引物開始并向 3' 端移動,。
熱循環(huán)儀是一種用于自動控制 PCR 中溫度循環(huán)和孵育時間的設(shè)備,。PCR 管專為熱循環(huán)儀而制造。為了選擇正確的 PCR 管,,有必要了解您所使用的熱循環(huán)儀的規(guī)格,。
此外,PCR有標(biāo)準(zhǔn)PCR,、梯度PCR、實(shí)時PCR,、qPCR等多種類型,,因此需要根據(jù)目的選擇合適的PCR。同時,,根據(jù)實(shí)驗類型適當(dāng)準(zhǔn)備實(shí)驗設(shè)備和試劑也很重要,。
通常使用的材料是聚丙烯。這是因為聚丙烯具有化學(xué)惰性,,可以承受熱循環(huán)過程中溫度的快速變化,。此外,管壁制造得薄而均勻,,以增強(qiáng)熱循環(huán)儀的傳熱,。
此外,我們還非常謹(jǐn)慎地確保我們的產(chǎn)品不含灰塵,、核酸內(nèi)切酶,、熱原、DNA,、潤滑劑,、染料、重金屬,、填料和其他雜質(zhì),。這是因為,如果產(chǎn)品在制造過程中受到污染,,灰塵顆??赡軙埩舨⒁种芇CR,或者DNA片段可能作為非特異性擴(kuò)增的模板,,從而降低實(shí)驗準(zhǔn)確性,。
該結(jié)構(gòu)由容納樣品的管部分和蓋部分組成。有一根管分開的單管型,,也有多管連接的8管型和12管型,。
瓶蓋形狀有平頂和圓頂兩種,又可分為兩種類型:一瓶蓋連接一根管子,,以及多瓶蓋與管子連接和分離的類型,。
管件有兩種類型:一種是正常高度(標(biāo)準(zhǔn)輪廓),,一種是低高度(低輪廓)。除了透明透明型外,,還有白色型,。
如何選擇PCR管
根據(jù)實(shí)驗類型選擇熱循環(huán)儀并使用與您所使用的熱循環(huán)儀兼容的熱循環(huán)儀非常重要。例如,,透明管(透明型)可以很容易檢查內(nèi)容物,,但白色管具有防止熒光折射和擴(kuò)散到管外的作用,增加qPCR的靈敏度,。
圓頂蓋可以快速傳遞熱循環(huán)儀的熱量,,而平蓋的優(yōu)點(diǎn)是易于用記號筆標(biāo)記,并且在采集樣品時易于用針刺穿,。
薄型管的高度較低,,最大限度地減少了反應(yīng)容器內(nèi)的空間面積,從而減少了蒸發(fā)的影響,,并且比普通管具有更高的導(dǎo)熱率,。薄型管有時被稱為快速管,因為它們與快速熱塊兼容,。
另外,,PCR管適用于中小型PCR實(shí)驗,因此如果規(guī)模較大,,則適合使用PCR板,。