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共焦激光顯微鏡是使用“激光共焦光學(xué)系統(tǒng)"的顯微鏡。
通過(guò)激光共焦光學(xué)獲得的高對(duì)比度圖像
通過(guò)組合二維掃描獲得的光學(xué)切片圖像創(chuàng)建全焦點(diǎn)圖像
根據(jù)光軸方向最大亮度檢測(cè)到的高度信息
上述組合可以讓您獲得穩(wěn)定,、高分辨率,、高對(duì)比度的 3D 圖像。
激光共焦光學(xué)器件
由于其照射的激光波長(zhǎng)短,、直線度高,，因此與均勻照射光的光學(xué)顯微鏡相比，產(chǎn)生的反射光的散射光較少,。
它的特點(diǎn)是在反射光形成圖像的位置放置“針孔"并限制激光路徑,，從而消除散射光。針孔消除了導(dǎo)致焦點(diǎn)失焦的光線（主要是來(lái)自物鏡焦點(diǎn)位置之外的光線）,，從而獲得高對(duì)比度的清晰觀察圖像,。
在設(shè)計(jì)共焦激光顯微鏡以獲得足夠的光量時(shí)，調(diào)整針孔直徑和探測(cè)器靈敏度是重要的一點(diǎn),。
二維掃描
共焦激光顯微鏡在X和Y方向上進(jìn)行二維掃描,，以獲得待觀察物體的平面圖像。
二維掃描有兩種方法,。
| 樣品掃描方式 |
|
|---|---|
| 激光掃描方式 |
|
通過(guò)在進(jìn)行二維掃描的同時(shí)沿高度方向移動(dòng)觀察目標(biāo)和物鏡,，可以獲得各層具有最高亮度和焦點(diǎn)的圖像,。當(dāng)組合這些斷層圖像時(shí),，獲得在所有表面上都聚焦的圖像（全聚焦圖像）。
身高信息
在光學(xué)顯微鏡的受光位置設(shè)置傳感器,，識(shí)別高度方向的信息,。
它感測(cè)成像位置處的光量變化，并將該點(diǎn)亮度達(dá)到最大時(shí)的 Z 軸方向位置記錄為“高度",。
這些高度數(shù)據(jù)和光學(xué)圖像組合起來(lái)構(gòu)建三維圖像的表面形狀,。
