MDA-MB-436人乳腺癌細(xì)胞（STR鑒定）

細(xì)胞描述

該細(xì)胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液，細(xì)胞呈多形性,，大多數(shù)細(xì)胞在間接免疫熒光染色時呈現(xiàn)與抗微管抗體的強烈反應(yīng)細(xì)胞描述

該細(xì)胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液,，細(xì)胞呈多形性，大多數(shù)細(xì)胞在間接免疫熒光染色時呈現(xiàn)與抗微管抗體的強烈反應(yīng),。

細(xì)胞特性

1） 來源：人，女性，乳腺腺癌胸水轉(zhuǎn)移灶

2） 形態(tài)：有多核成分的多形細(xì)胞,，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

MDA-MB-436人乳腺癌細(xì)胞（STR鑒定）

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。 

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1) 準(zhǔn)備L15 基礎(chǔ)培養(yǎng)基89%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%;P/S1%;（還原型）16ug/ml;胰島素0.01mg/ml,。

2)注意事項：

a． 該細(xì)胞不能用消化,，傳代時，使用細(xì)胞刮鏟輕輕把細(xì)胞刮下來,。抽出細(xì)胞液離心后傳到新的培養(yǎng)瓶中,。

b． L-15培養(yǎng)基配方設(shè)計用于與大氣進(jìn)行自由氣體交換。使用該培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時應(yīng)使用空氣100%,。CO 2和空氣混合物對細(xì)胞有害,。如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng),，培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣,。

3) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，100%,； 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4) 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

可以通過將貼壁細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟刮入含有漂浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中,，通過離心收集細(xì)胞,，將細(xì)胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來對細(xì)胞進(jìn)行傳代。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進(jìn)行,。后續(xù)的傳代可根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例,；

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程（使用細(xì)胞刮鏟收取細(xì)胞）收集細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。

將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 ,。,。

細(xì)胞特性

1） 來源：人，女性,，乳腺腺癌胸水轉(zhuǎn)移灶

2） 形態(tài)：有多核成分的多形細(xì)胞,，貼壁生長

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況,。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理,。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。  

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1) 準(zhǔn)備L15 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                    89%

優(yōu)質(zhì)胎牛血清                     10%

P/S                1%

（還原型）                16ug/ml

胰島素                             0.01mg/ml

2)注意事項：

a． 該細(xì)胞不能用消化,，傳代時,，使用細(xì)胞刮鏟輕輕把細(xì)胞刮下來。抽出細(xì)胞液離心后傳到新的培養(yǎng)瓶中,。

b． L-15培養(yǎng)基配方設(shè)計用于與大氣進(jìn)行自由氣體交換,。使用該培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時應(yīng)使用空氣100%。CO 2和空氣混合物對細(xì)胞有害,。如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的,，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣,。

3) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，100%； 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

4) 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

可以通過將貼壁細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟刮入含有漂浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中，通過離心收集細(xì)胞,，將細(xì)胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來對細(xì)胞進(jìn)行傳代,。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進(jìn)行。后續(xù)的傳代可根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程（使用細(xì)胞刮鏟收取細(xì)胞）收集細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項：

 1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。