RPMI8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞（STR鑒定）

細胞介紹：沒有證據(jù)表明該細胞能產(chǎn)生重鏈（細胞質(zhì)型或分泌型）。 

細胞特性

1） 來源：外周血 疾?。簼{細胞瘤,；骨髓瘤 細胞類型：B淋巴細胞

2） 形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮生長

3） 含量：>1x106細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

RPMI8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞（STR鑒定）

運輸和保存：干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備IMDM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，20%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞,，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個/mL（不同細胞對密度要求不同,，）可以維持細胞的正常生長,。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min,，棄去上清,，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例,；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。