THP-1人單核細胞白血病細胞(STR鑒定）

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用,，無表面和胞質免疫球蛋白,。可以用佛波醇 TPA誘導單核細胞分化。

細胞特性

1） 來源：急性單核細胞白血病,，單核細胞

2） 形態(tài)：單核細胞,，懸浮

3） 含量：>1x106細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

THP-1人單核細胞白血病細胞(STR鑒定）

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據,。

3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640培養(yǎng)基,；優(yōu)質胎牛血清，10%,；0.05 mM β－(細胞培養(yǎng)級 ),；雙抗，1%,。

2） 參考傳代比例：傳代時控制細胞密度在2-4 ×10⁵cell / mL,，并在細胞生長至8-10 ×10⁵cell / mL時進行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時換液

4） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

5） 凍存液：培養(yǎng)液95%,，DMSO 5%（使用該凍存液后,，按照我?guī)斓慕涷瀼吞K存活率約50%，復蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復生長）

6） 【注意事項】：

該細胞為懸浮細胞,，根據培養(yǎng)經驗以及客戶的反饋,，傳代時使用【半換液法】對細胞狀態(tài)較為有利，因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進行傳代,。

1. 您在收到我們提供的用15ml離心管發(fā)貨的細胞后,，請不要通過離心的方式收集細胞，可以先準備兩個新的T25培養(yǎng)瓶,，然后將細胞混合均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中,，補加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中,。

2. 您在收到的是用T25培養(yǎng)瓶發(fā)貨的細胞,，請先通過離心的方式收集細胞，然后將細胞重懸加入12ml按照說明書要求配置的培養(yǎng)基吹打均勻后移入兩個新的T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)即可,。

3. thp-1懸浮細胞,。該細胞在培養(yǎng)時更喜歡溫和處理，培養(yǎng)時盡量少對細胞進行離心處理以此造成對細胞的傷害,。換液時不要全培養(yǎng)基更換,，建議您使用【半換液法】進行傳代，添加細胞培養(yǎng)基以稀釋細胞至維持密度即可,。

4. 細胞對血清質量較為敏感,，我?guī)旖ㄗh您使用進口優(yōu)質血清進行培養(yǎng)。FBS不要滅活,，如果細胞生長緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時將FBS濃度增加到20%

5.該細胞的培養(yǎng)液中需添加β-（細胞培養(yǎng)級別）,，若不添加，可能會對細胞狀態(tài)造成影響,。

β-的穩(wěn)定性有限,，不可將β-添加到培養(yǎng)基中長期儲存，在每次傳代或液體添加時再添加β-,。

β-（2-）被添加到淋巴細胞或其他細胞培養(yǎng)物中,，因為在培養(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半供不應求，而則很多,。有些細胞（例如T細胞）無法將半轉運到細胞質中,，必須將其轉化為半。β-將還原為可被細胞轉運的形式,，然后轉化為細胞生長所需的半,。  β-還是一種還原劑，可以分解培養(yǎng)中細胞產生的許多有毒代謝產物,，從而改善細胞周圍的環(huán)境,。

6.該細胞對細胞密度較為敏感,，培養(yǎng)、傳代時請注意保持細胞密度在合適的范圍（具體請參考細胞說明書）,。

7..該細胞凍存后復蘇率較低,，凍存時請酌情提高細胞量

8.通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,，來完成細胞的全換液,。

ATCC有關thp-1細胞保持細胞活力的說明

（頻繁的細胞計數是監(jiān)測thp-1的最佳方法。這些細胞應該每2至3天通過向燒瓶中簡單加入少量新鮮培養(yǎng)基（使它們具有條件培養(yǎng)基）來培養(yǎng),。您不需要每次都離心細胞并重新傳代,。當在我們的實驗室中培養(yǎng)時，到第2天,，細胞通?？梢詳U增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當細胞密度達到8×10 ⁵個活細胞/ ml時需要進行傳代,。不允許細胞密度超過1×10（6）活細胞/ ml,。）

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞換液: 通常情況下可以通過向正在生長的細胞中添加培養(yǎng)基來維持細胞的生長,，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,，來完成細胞的全換液。

3） 細胞傳代：傳代時控制細胞密度在2-4 ×10⁵cell / mL,，并在細胞生長至8-10 ×10⁵cell / mL時進行傳代,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。    

1,，細胞凍存時，取上清,，可使用血球計數板計數,。

      2，4min ,，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入凍存液，輕輕混勻,，DMSO終濃度為5%,，細胞密度2x10⁶/支，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識。

注意事項：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮,。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害,。