MC38小鼠結腸癌細胞

細胞介紹

結腸癌,；雌性；C57BL/6,。

細胞特性

1） 來源：結腸癌

2） 形態(tài)：上皮樣,，半貼壁半懸浮細胞

3） 含量：>1x10⁶ 細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

MC38小鼠結腸癌細胞

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯系,。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據,。

3）半貼細胞和貼壁不牢（懸?。?/span>細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況,，若細胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備 DMEM 基礎培養(yǎng)基                 85%

優(yōu)質胎牛血清                    10%

MEM NEAA非必需氨基酸          1%

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉           1%

GlutaMAX-1               1%

HEPES                         1%

P/S         1%

1） 培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

2） 凍存細胞：凍存細胞時,，用FBS重懸細胞，然后加入一定量的DMSO,，輕輕混合均勻后移入到凍存管中,，DMSO終濃度為10%。

二． 細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

該細胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細胞，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中,。用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中,。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3. 將收集到的懸浮細胞,、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清,，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數板計數,，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱,、代數、日期等信息,。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項：

 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。