2V6.11 人胚腎細(xì)胞

細(xì)胞介紹

這株細(xì)胞是2001年從人胚腎細(xì)胞株293衍化而來。293細(xì)胞用攜帶Zeocin-抗性標(biāo)記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細(xì)胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染,。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來。載體包含SV40病毒序列,。

2V6.11細(xì)胞株最初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到,。2V6.11細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的人腺病毒E434KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測。這株細(xì)胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具,。
細(xì)胞特性
1） 來源：人胚胎腎臟
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣,，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

2V6.11 人胚腎細(xì)胞

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。
細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們,。
2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí),，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度,?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?/span>10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。
3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。
5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）,。
6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 ,。      
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗 1%
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3） 凍存液：90%FBS,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3. 輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為類；

1,，細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后,，加入1ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2,，4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識。
3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。