IPEC-J2 豬小腸上皮細胞永生化

細胞鑒定： 免疫熒光鑒定已通過

細胞來源： 國內(nèi)建系

細胞背景 ：小腸黏膜,，小腸的管壁分為黏膜層,、黏膜下層、肌層和外膜四層,。小腸黏膜是最靠近管腔的 一層,。由上皮,、固有層和黏膜肌層組成。上皮和固有層向腸腔突起形成腸絨毛,，上皮向固有 層凹陷形成小腸腺,。小腸黏膜的上皮為單層柱狀上皮，由吸收細胞,、杯狀細胞和少量內(nèi)分泌 細胞組成,。小腸腺除上述細胞外，還有潘氏細胞和干細胞,。吸收細胞主要功能是消化吸收,， 此外也參與分泌性免疫球蛋白 A 的釋放。杯狀細胞分泌黏液,，有滑和保護作用,。潘氏細胞 分泌防御素、,，對腸道微生物有殺滅作用,。內(nèi)分泌細胞種類多，所分泌的激素參與調 控胃腸活動,。干細胞增殖,、分化，補充脫落的上皮細胞,。固有層的結締組織含有大量小腸腺,， 以及豐富的淋巴細胞、漿細胞,、巨噬細胞,、嗜酸性粒細胞和肥大細胞。黏膜肌層由內(nèi)環(huán)形和 外縱行兩薄層平滑肌組成,。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶 SV40 基因

l細胞特性 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

用途：僅供科研使用。

IPEC-J2 豬小腸上皮細胞永生化

 培養(yǎng)條件 1）準備上皮細胞專用培養(yǎng)基2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37 攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

注意事項 1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（

w / v）-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（

T25 瓶 1-2mL,，T75 瓶 2-3mL）,，

置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間）,，然后在顯微鏡下

觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml

含 10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 3-5min,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中,，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)

基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶 1：2 傳代 。

 運輸形式 低溫：1mL 凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)

干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系。

常溫: T25 瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

生物安全 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護,，

所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套,、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液

氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹

掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。