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【產(chǎn)品名稱】Gibco分散酶Dispase II,，粉末

【產(chǎn)品貨號】17105041

【產(chǎn)品規(guī)格】5 g

【產(chǎn)品狀態(tài)】凍干

【產(chǎn)品類型】細胞培養(yǎng)解離試劑

【產(chǎn)品效期】24個月

【產(chǎn)品運輸】室溫

【產(chǎn)品簡介】Gibco分散酶Dispase II,，粉末是一種氨基內(nèi)肽酶，可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵,。該序列常見于膠原蛋白,。分散酶 II 具有溫和的蛋白水解作用，可用于原代細胞的分離和常規(guī)傳代,。分散酶 II 相對溫和,，在生理溫度和 pH 值條件下具有良好的解離能力，通?？删S持細胞膜完整性,。Gibco™ 分散酶 II 在多粘芽孢桿菌中生產(chǎn)，包裝形式為凍干非無菌粉末,，供細胞或組織解離等研究使用,，并防止在懸浮培養(yǎng)中結(jié)團。我們保證 Gibco™ 分散酶 II 的活性大于 0.5 單位/mg,。

【產(chǎn)品使用】

重建Dispase

1.  將非無菌酶溶解在Dulbecco 's磷酸緩沖鹽水(DPBS)中,，不含鈣和鎂至10 mg/mL。

2.   再用不含鈣和鎂的DPBS稀釋至終濃度0.6-2.4 U/mL,。

注意:濃度不建議高于2.4 U/mL,。

3.通過0.22µm的過濾膜過濾滅菌。

分離組織

1.用無菌剪刀將組織切成3-4毫米的小塊,。

2.在不含鈣和鎂的無菌DPBS中清洗幾次組織片,。

3.將組織片段浸入Dispase溶液(0.6-2.4 U/mL)中，37℃孵育,。

4.在37°C下緩慢攪拌,，直到組織充分溶解。對于致密組織,，我們建議孵育1小時,。即使經(jīng)過幾個小時的消毒，細胞也不會受到不良影響。

5.如有必要,，通過無菌不銹鋼或尼龍網(wǎng)將分散的細胞從殘留組織中分離出來,，或者在較大的碎片沉淀后簡單地倒入細胞。如果需要進一步分解,，可以向剩余的組織碎片添加新鮮的Dispase溶液,。

6.離心使細胞成球，倒入酶溶液,。

7.將細胞顆粒重新懸浮在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中,。使用伯爵夫人®自動細胞計數(shù)器確定活細胞密度(可使用自動或手動替代方法)。

8.將細胞植入含有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中,，在預(yù)定條件下進行培養(yǎng),。

注:通過將濃度為0.3-0.6 U/mL的disase與膠原酶(60-100 U/mL)混合，可以更有效地分離組織,。