目錄:柏萊源(天津)生物科技有限公司>>生物試劑>>試劑盒kit>> HG-TP001-2GT7 RNA Polymerase ELISA 檢測試劑盒(2G)
供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 96T |
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應用領域 | 生物產業(yè),制藥/生物制藥 |
貨號:HG-TP001-2G
產品簡介:
本試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫檢測(ELISA)法,,將T7 RNA Polymerase標準品和待測樣本加入預包被抗T7 RNA Polymerase抗體的酶標板,,然后加入稀釋后的生物i素標記的檢測抗體和Streptavidin-HRP,形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP復合物,,洗板后加入TMB顯色液顯色,。TMB在HRP酶的催化下由無色轉化成藍色并在終止液的作用下最終轉化成黃色,。黃色的深淺與樣本中被檢測到的T7 RNA Polymerase的量呈正相關。
檢測范圍:0.25 ~ 16 ng/mL
定 量 限:0.25 ng/mL
檢 測 限:0.012 ng/mL
精 密 度:CV% < 10%, RE% < 士15%
96T
適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化,、中間工藝過程的雜質控制以及終產品的放行檢測,。
組分 | 規(guī)格 | 配制 |
標準品(Standard) | 32 ng×6管 | 建議按稀釋方式操作 |
包被酶標板(Coated Plate) | 8孔×12條 | 即用型 |
樣品稀釋液(Sample Diluent Buffer) | 15mL×4瓶 | 即用型 |
濃縮洗液(Wash Buffer 10×) | 50 mL×1瓶 | 用去離子水進行10倍稀釋 |
檢測抗體(Detection Antibody 100×) | 65μL×1管 | 用抗體稀釋液進行100倍稀釋 |
抗體稀釋液(Antibody Diluent Buffer) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
TMB顯色液(TMB Substrate) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
終止液(Stop Solution) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜(Sealing film) | 5張 | 即用型 |
說明書 | 1份 | 即用型 |
備 注:未開封試劑盒,在2~8℃條件下有效期為12個月,。
◆酶標儀
◆去離子水
◆微孔板恒溫振蕩器
◆全新濾紙
◆微量移液器及吸頭
◆渦旋振蕩器
實驗前準備
1.所有試劑以及待測樣本需要恢復室溫(18~25°C),。所有試劑現配現用
2.1×洗液配制:濃縮洗液平衡至室溫(18~25℃),不要有結晶,?;靹蚝蟾鶕昧浚∵m量去離子水按1:9的比例,,將10×洗液稀釋10倍,,最終得到1×洗液。
3.1×檢測抗體配制:計算實驗所需工作液體積,,取適量100×檢測抗體,,用抗體稀釋液按1:99稀釋,充分混勻備用,。
4.標準品的配制:取一支標準品,,加200 μL去離子水,渦旋混勻,,終濃度為160 ng/mL;取60uL濃度為160ng/mL標準液,,加至540uL樣品稀釋液,渦旋混勻,,終濃度為16ng/mL,,用移液器將300uL樣品稀釋液移至每個離心管中,再按照下圖進行1:1梯度梯度稀釋,。
5. 樣品使用樣品稀釋液進行稀釋,,稀釋后的樣品即為:樣品稀釋工作液。
操作步驟
使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫(18~25°C),。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定,。
1.使用前,將所有試劑充分混勻,,避免產生氣泡,。
2.根據實驗孔數量,確定所需的板條數目,,剩余板條放回鋁箔袋,,密封。
3.加樣與檢測抗體工作液:每孔加入100μL標準品、樣品稀釋工作液,、陰性對照至相應孔中,。每孔加1x檢測抗體50uL。用封板膜封板后置37°C恒溫震蕩培養(yǎng)箱,,600-800rpm,,溫育60分鐘。
4.洗滌:棄去各孔內液體,,用1x洗液注滿微孔(300 uL/孔),,靜置30秒后棄去孔內液體;重復3次,每一次洗板完成后在濾紙上拍干,。
5.顯色:每孔分別加100 μL底物顯色液,,輕微振蕩混勻后用封板膜封板置25℃℃顯色15分鐘。
6.測定:每孔加終止液100 L,,輕微混勻,。選擇酶標儀主波長450nm,參考波長630nm,,測定各孔吸光值(OD值),。
結果處理
1.標準曲線OD處理(見下例,僅為示例,,具體以實際測定為準)
標準品濃度(ng/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
16 | 2.8708 | 2.9433 | 2.9071 |
8 | 2.0941 | 2.0731 | 2.0836 |
4 | 1.2382 | 1.2562 | 1.2472 |
2 | 0.7254 | 0.6866 | 0.7060 |
1 | 0.3880 | 0.3634 | 0.3757 |
0.5 | 0.2124 | 0.1877 | 0.2001 |
0.25 | 0.1233 | 0.117 | 0.1202 |
0.00 | 0.0393 | 0.0422 | 0.0408 |
2.標準品理論濃度與對應OD值以四參數進行擬合,,得到標準曲線(如下圖所示)。
1.樣品首i次檢測,,建議進行至少3個連續(xù)倍數的稀釋,,以在標曲范圍內產生至少一個稀釋后樣品。
2.試劑按標簽說明儲存,,使用前室溫平衡,。
3.包被酶標板使用前請平衡至室溫再打開外包裝袋,實驗中不用的板條立即放回包裝中密封,,4℃可保存一個月,。其他不用的試劑應包裝好或蓋好。
4.實驗操作中請使用一次性的吸頭,,避免交叉污染,。
5.使用前檢查試劑盒內各種試劑。試劑的稀釋,、加樣和終止反應應充分混勻或搖勻對實驗結果尤為重要,。
6.洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在潔凈的紙巾上充分拍干,直至看不到水印,。勿將紙巾放入反應孔中吸水,。
7.底物顯色液對光敏感,,避免長時間暴露于光下,避免與金屬接觸影響結果,。
8.本產品為一次性使用的試劑盒,,請在效期內使用,。
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