人腫瘤壞死因子 (TNF-α) ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)：HG-TA001

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)法,，將人TNF-a標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本加入預(yù)包被抗人 TNF-a抗體的酶標(biāo)板，然后加入稀釋后的生物i素標(biāo)記的人 TNF-a檢測(cè)抗體,，最后加入 Streptavidin-HRP,，形成抗體+抗原+抗體-Biotin+ SA-HRP 復(fù)合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色,。TMB 在 HRP酶的催化下由無(wú)色轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色,。黃色的深淺與樣本中被檢測(cè)到的人 TNF-α 的量呈正相關(guān)。

檢測(cè)范圍: 1.37~1000pg/mL

靈敏度:0.21 pg/mL

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過(guò)程的優(yōu)化,、中間工藝過(guò)程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測(cè),。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲(chǔ)溫度均為 2~8℃,，有效期12個(gè)月,。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆恒溫培養(yǎng)箱

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.所有試劑以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫(18~25°C)。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用,。

2.1x 洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18-25℃）,，不要有結(jié)晶?；靹蚝蟾鶕?jù)用量,，取適量用超純水按1：9的比例，將10x洗液稀釋10倍,，最終得到1x洗液,。

3.標(biāo)準(zhǔn)品的配制:

S1至 S7 和 S0 用于血清和血漿。

其他類(lèi)型樣本,，用緩沖液(SPB,樣品基質(zhì))制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,，例如細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織研磨液,、細(xì)胞裂解物等,。尿樣使用AB(檢測(cè)緩沖液)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

人TNFa標(biāo)準(zhǔn)品S(10000pg/mL)30μL+270μLSPB作為高標(biāo)準(zhǔn)(1000 pg/mL),，每個(gè)稀釋試管中加入 200 μLSPB,使用高標(biāo)準(zhǔn)品按 1:2 梯度稀釋,。每一步稀釋必須充分混勻。SPB用作零標(biāo)準(zhǔn)(0pg/mL),。

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測(cè)樣本需要恢復(fù)室溫(18~25°C),。建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣本進(jìn)行雙復(fù)孔測(cè)定。

1.試劑準(zhǔn)備:提前準(zhǔn)備好各種待測(cè)試劑,、稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,。

2.酶標(biāo)板條確定：計(jì)算待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品所需酶標(biāo)板條，將酶標(biāo)條從鋁箔袋取出,，剩余的酶標(biāo)條放回鋁箔袋中并封好袋口,，低溫保存。

3.每孔加入 50uL 檢測(cè)緩沖液,。

4.樣本及檢測(cè)抗體孵育：每孔加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,，確保15 min內(nèi)完成點(diǎn)樣。再向每孔加入50 μL 檢測(cè)抗體,。用封板膜封板,，置于恒溫孵育器，500轉(zhuǎn)/分鐘,、25℃孵育1小時(shí),。

5.洗板：棄去孔中液體，加入1×洗液（300 μL/孔）洗板4次,，拍干酶標(biāo)板中殘留液體,。

6.酶結(jié)合物孵育：將酶結(jié)合物加入酶標(biāo)板中，100 μL/孔,，用封板膜封板,，置于恒溫孵育器,，500轉(zhuǎn)/分鐘、25℃孵育30分鐘,。

7.洗板:同步驟 5,。

8.每孔加入100 μL顯色底物TMB，室溫（18-25℃）孵育15~20分鐘,。

9.終止:每孔加入 100 uL終止液,，輕輕震動(dòng)酶標(biāo)板至顯色均勻。

10.讀值:20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長(zhǎng)處的吸光度值,。450nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng),，630nm 作為參比波長(zhǎng)。

結(jié)果處理

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見(jiàn)下例,，僅為示例,，具體以實(shí)際測(cè)定為準(zhǔn)）

2. 標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng) OD 值以四參數(shù)進(jìn)行擬合,，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(如下圖所示)。

注意事項(xiàng)

1.樣品首i次檢測(cè)，建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋?zhuān)栽跇?biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品,。

2.試劑按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存,，使用前室溫(18-25°C)平衡,。

3.包被酶標(biāo)板使用前,，請(qǐng)平衡至室溫(18-25°C)再打開(kāi)外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封,，4℃可保存一個(gè)月其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。

4.實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染,。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑,。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要,。

6.洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙中上充分拍干,，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水,。

7.底物顯色液對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果,。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒,，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用。

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