細胞殘留人白介素4（IL-4）ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-IL004

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)法,，將人IL-4標準品和待測樣本加入預(yù)包被抗人IL-4抗體的酶標板,，然后加入稀釋后的生物i素標記的人IL-4檢測抗體,，最后加入 Streptavidin-HRP,，形成抗體+抗原+抗體 -Biotin+ SA-HRP 復(fù)合物，洗板后加入 TMB 顯色液顯色,。TMB 在 HRP酶的催化下由無色轉(zhuǎn)化成藍色并在終止液的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的人 IL-4 的量呈正相關(guān),。

檢測范圍:1.37~1000 pg/mL

靈 敏 度:0.28 pg/mL

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化,、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲溫度均為 2~8℃，有效期12個月,。

需自行準備的材料

◆酶標儀

◆去離子水

◆微孔板恒溫振蕩器

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實驗前準備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復(fù)室溫(18~25°C),。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用,。

2.1x 洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18-25℃）,，不要有結(jié)晶,?；靹蚝蟾鶕?jù)用量,，取適量用超純水按1：9的比例,，將10x洗液稀釋10倍,，最終得到1x洗液,。

3.標準品的配制:

即用型標準品S1~S7和S0可用于血清和血漿樣本,。

其他類型樣本,，用樣本基質(zhì)（SPB）制備標準曲線，例如細胞培養(yǎng)上清液,、組織研磨液,、細胞裂解液等,。尿液樣本使用檢測緩沖液制備標準曲線,。

標準品稀釋步驟：人IL-4高濃度標準品S（10000pg/mL），30 μL + 270 μL SPB作為高標準品（1000 pg/mL）,，每個稀釋試管中加入200 μL SPB,，使用高標準品按1：2梯度稀釋。在進行下一步轉(zhuǎn)移之前徹i底混合每個試管,。SPB用作零標準（0 pg/ mL）,。

操作步驟

使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復(fù)室溫(18~25°C)。建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復(fù)孔測定,。

1.試劑準備:提前準備好各種待測試劑,、稀釋好的標準品和待測樣本,。

2.酶標板條確定：計算待測樣本和標準品所需酶標板條,，將酶標條從鋁箔袋取出,，剩余的酶標條放回鋁箔袋中并封好袋口,，低溫保存,。

3.每孔加入 50uL 檢測緩沖液,。

4.樣本及檢測抗體孵育：每孔加入50 μL標準品和待測樣本,，確保15 min內(nèi)完成點樣,。再向每孔加入50 μL 1x檢測抗體,。用封板膜封板，置于恒溫孵育器,，500轉(zhuǎn)/分鐘,、25℃孵育1小時,。

5.洗板：棄去孔中液體，加入1×洗液（300 μL/孔）洗板4次,，拍干酶標板中殘留液體。

6.酶結(jié)合物孵育：將酶結(jié)合物加入酶標板中,，100 μL/孔,，用封板膜封板，置于恒溫孵育器,，500轉(zhuǎn)/分鐘,、25℃孵育30分鐘。

7.洗板:同步驟 5,。

8.每孔加入100 μL顯色底物TMB,，室溫（18-25℃）孵育15~20分鐘。

9.終止:每孔加入 100 uL終止液,，輕輕震動酶標板至顯色均勻,。

10.讀值:20 min 內(nèi)讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值。450nm 作為檢測波長,，630nm 作為參比波長,。

結(jié)果處理

1. 標準曲線OD處理（見下例，僅為示例,，具體以實際測定為準）

2. 標準品理論濃度與對應(yīng) OD 值以四參數(shù)進行擬合,，得到標準曲線(如下圖所示)。

注意事項

1.樣品首i次檢測,，建議進行至少3個連續(xù)倍數(shù)的稀釋,，以在標準曲線范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個稀釋后樣品。

2.試劑按標簽說明儲存,，使用前室溫(18-25°C)平衡,。

3.包被酶標板使用前,，請平衡至室溫(18-25°C)再打開外包裝袋，實驗中不用的板條立即放回包裝中密封,，4℃可保存一個月其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。

4.實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染,。

5.使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑,。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)嶒灲Y(jié)果尤為重要,。

6.洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙中上充分拍干,，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水,。

7.底物顯色液對光敏感,，避免長時間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果,。

8.本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒,，請在效期內(nèi)使用。

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