貨號(hào)： HG-CL100

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒用于生物制品樣本前處理,，精準(zhǔn)抽提各種生物制品中宿主細(xì)胞殘DNA 。本試劑盒適用于多種基質(zhì)緩沖溶液,， 有效提取純化微量的DNA,。可與譜新生物宿主細(xì)胞（CHO,、E.coli,、Vero、Human,、質(zhì)粒,、SV40LTA &EI A等）DNA（qPCR）檢測(cè)試劑盒配合使用。

規(guī)格：

100 人份

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期：

規(guī)定儲(chǔ)存條件下12個(gè)月,。

本試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)材料：

無水乙醇（分析純）,、1×PBS 緩沖液（無Mg 2+ 和Ca 2+，除菌過濾）,、異丙醇（分析純）
渦旋儀、磁力架、離心機(jī),、水浴鍋/金屬浴,、移液器
1.5mL 無菌低吸附離心管、低吸附吸頭,、一次性手套

試驗(yàn)流程：

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1,、每次試驗(yàn)需要在干凈的試劑瓶中用無水乙醇和滅菌過的超純水配制成新鮮的80%乙醇。
2,、單個(gè)樣本的結(jié)合液的準(zhǔn)備：9 μL糖原+0 .2 μL酵母tRNA（如果提取酵母DNA,，結(jié)合液中不加酵母tRNA）。
注：?jiǎn)未挝毫坎簧儆?μL,。
3,、洗滌液準(zhǔn)備：洗滌液使用前加30mL的無水乙醇，充分混勻后使用,，同時(shí)做好標(biāo)記,，每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持瓶中的無水乙醇含量,。

樣本準(zhǔn)備

1,、樣本稀釋：如果待檢測(cè)樣本是生物制品純化過程中的上游中間樣本，可能含有較高的DNA含量,。為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性,，使樣本的檢測(cè)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)，可以用1× PBS對(duì)高DNA含量樣本進(jìn)行適當(dāng)比例稀釋后再進(jìn)行樣本提取,， 一般可考慮將高DNA含量樣本稀釋100倍或1000倍,。 

2、干粉樣本：一般可考慮將干粉樣本稀釋成10mg /mL或100mg/mL,，再進(jìn)行提取操作,。 

3、pH值要求：使用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整樣品的pH至中性（pH6. 0~ 8 .0）進(jìn)行提取,。 

4,、平行處理：每個(gè)樣本建議進(jìn)行三次DNA提取處理。 

5,、樣品加標(biāo)：待處理樣品的DNA加標(biāo)濃度為樣品核酸濃度的2- 10倍為宜,，建議樣品加標(biāo)體積不超過待處理樣本體積的1/10。 

6,、陰性對(duì)照：每次試驗(yàn)需用無模板稀釋液（1× PBS）與待測(cè)樣本一同處理,。

操作流程：

1、每個(gè)待處理樣本取100 μL于1.5 mL離心管中,， 待進(jìn)一步提取,。 

2,、每個(gè)100μL樣本中加入25 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋震蕩30 s,，瞬時(shí)離心,，65 ℃孵育15 min 。

提取步驟：

1,、孵育完成后將離心管瞬時(shí)離心,，之后依次加入9.2 μL結(jié)合液、50 μL裂解液和150 μL異丙醇,，20 μL磁珠（磁珠使用前需充分混勻,，確保每次加入的磁珠量均一致，以免造成DNA得率不一致）,，渦旋振蕩5min,，快速離心10 s 。 

2,、將離心管置于磁力架,，輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng)，待磁珠聚集于貼近磁力架的管壁后,，保持離心管固定于磁力架上,，用移液槍吸去上清，注意不要觸碰磁珠,。

3,、加入500μL洗滌液（ 使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），渦旋振蕩30 s,，確保磁珠分散,，離心管壁無聚集磁珠?？焖匐x心10s后將離心管重新置于磁力架上輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng),，待磁珠聚集于貼近磁力架的管壁后，靜置1 min,，用移液器小心吸去上清,。 

4、加入500μL新鮮配制的80 %乙醇,，渦旋振蕩30 s,，確保磁珠分散，離心管壁無聚集磁珠,?？焖匐x心10 s 后將離心管重新置于磁力架上輕輕地左右轉(zhuǎn)動(dòng)，待磁珠聚集于貼近磁力架的管壁后,，靜置1 min,，用移液器小心吸去上清,。 

5、為保證盡量吸出殘留乙醇,，可將離心管快速離心10s后,，置于磁力架上用10μL移液器吸出殘留乙醇。 

6,、打開管蓋室溫（18-25℃）干燥3- 5min（干燥時(shí)間依具體情況進(jìn)行延長(zhǎng)或縮短；肉眼隨時(shí)注意觀察,，避免磁珠過分干燥）,。注： 干燥過程中磁珠過干或有乙醇?xì)埩舳紩?huì)影響樣本回收率。干燥也可選擇鼓風(fēng)干燥,，一般建議鼓風(fēng)干燥2min,。 

7、將離心管從磁力架取下,，每管加入100μL 洗脫液,，渦旋振蕩1min，70℃孵育7min,，期間每2-3 min渦旋混勻一次,。 

8、 孵育完成后,，將離心管高速離心1min,，然后靜置于磁力架上，待磁珠分離后,，用移液器小心轉(zhuǎn)移上清到新的1.5 mL 離心管中,。

注意事項(xiàng)：

1、實(shí)驗(yàn)開始前,，為減少污染建議用酒精擦拭臺(tái)面,、移液器、槍頭盒等表面,。 

2,、注意在不同加樣步驟間及時(shí)更換吸頭，避免交叉污染,。 

3,、所有試劑需平衡至室溫（18-25℃），再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。 

4,、在磁珠洗滌或洗脫過程中，每次振蕩混勻后,，都要短時(shí)間快速離心,，以保證沒有磁珠液附著在離心管管蓋和管壁上,。 

5、盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化就立即進(jìn)行后續(xù)DNA檢測(cè),，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。 

6、試劑應(yīng)儲(chǔ)存于規(guī)定環(huán)境下,，不同批次試劑盒試劑不建議混用,。 

7、最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性,、操作者的操作方法及實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),。

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