限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列,，并在特*位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡(jiǎn)稱限制酶,。高保真限制性內(nèi)切酶是一類經(jīng)過(guò)基因工程改造的分子生物學(xué)工具酶,，能夠特異性識(shí)別并切割雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，同時(shí)在反應(yīng)過(guò)程中保持較低的非特異性切割活性,。
優(yōu)勢(shì)：
高切割效率：基因工程改造提升酶促反應(yīng)速率,，單位時(shí)間內(nèi)可處理更多樣本。
寬反應(yīng)條件范圍：耐受pH,、離子強(qiáng)度波動(dòng),，兼容不同來(lái)源DNA樣本。
高保真限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用：
1,、基因工程：用于構(gòu)建基因表達(dá)載體,，實(shí)現(xiàn)外源基因的精準(zhǔn)插入,；在基因敲除/替換實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)特異性切割目標(biāo)序列完成基因編輯,。
2,、分子克隆：切割PCR產(chǎn)物與載體DNA,，通過(guò)黏性末端互補(bǔ)連接實(shí)現(xiàn)重組DNA分子構(gòu)建,，平末端產(chǎn)物則適用于T4 DNA連接酶介導(dǎo)的連接反應(yīng)。
3,、表觀遺傳學(xué)研究：對(duì)DNA甲基化狀態(tài)敏感的酶可用于分析甲基化位點(diǎn)對(duì)基因表達(dá)的影響,。
4、測(cè)序與SNP鑒定：作為測(cè)序預(yù)處理工具,，通過(guò)產(chǎn)生可預(yù)測(cè)的酶切片段輔助DNA序列分析,；在ddPCR中用于靶向片段富集。
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