E.coli殘留DNA檢測試劑盒（qPCR-熒光探針法）是一款基于Taqman探針技術的科研級檢測工具,，專為精準定量生物制品（如疫苗、基因治療藥物）中的大腸桿菌宿主細胞DNA殘留而設計,。該試劑盒結合高靈敏度熒光定量PCR技術,，檢測限低至3×101fg/μL，支持從中間品到成品的全流程質量控制,，為生物制藥行業(yè)提供高效,、可靠的檢測方案。
- 超高靈敏度：檢測范圍覆蓋3×10?fg/μL至3×10?fg/μL,，最i低檢測限達fg級,，滿足嚴苛質控需求。
- 國家標準品配套：采用國家標準的E.coli DNA定量參考品,，確保數(shù)據(jù)準確性與可溯源性,。
- 廣泛儀器兼容性：適配ABI7500、BioRad CFX96,、Roche LightCycler 480等主流qPCR儀器（需根據(jù)機型選擇ROX參比染料）,。
- 操作便捷：即用型試劑設計，配合前處理試劑盒（貨號HG-CL100）,，簡化實驗流程,。
- 生物制藥生產(chǎn)：監(jiān)測重組蛋白、抗體藥物中宿主DNA殘留,，確保成品安全性,。
- 基因治療研發(fā)：評估病毒載體或基因編輯產(chǎn)品的純度。
- 科研實驗：用于微生物學、分子生物學研究中的DNA定量分析,。
檢測原理（采用Taqman探針法）：
1. 探針標記：熒光探針與目標DNA特異性結合,，PCR擴增時探針水解釋放熒光信號。
2. 實時定量：通過熒光強度變化（FAM通道）實時監(jiān)測DNA擴增,，結合標準曲線計算殘留量,。
1. 樣品前處理：使用配套試劑盒（HG-CL100）提取純化DNA。
2. 標準品稀釋：按梯度稀釋國家參考品（ST0-ST5）,，制備標準曲線,。
標準品代號 | 稀釋體積 | 濃度（fg/μL） |
ST0 | 10μL E.coli DNA 定量參考品 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×106 |
ST1 | 10μL ST0 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×105 |
ST2 | 10μL ST1 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×104 |
ST3 | 10μL ST2 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×103 |
ST4 | 10μL ST3 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×102 |
ST5 | 10μL ST4 + 90μL DNA 稀釋液 | 3 ×101 |
3. 反應體系配置：混合2×qPCR緩沖液、引物探針Mix及適配ROX,，加入待測樣本,。
4. qPCR程序運行：
- 預變性：95℃ 10分鐘
- 40次循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（熒光采集）
5. 數(shù)據(jù)分析：通過Ct值計算樣本濃度，驗證標曲線性（R2>0.98）與加標回收率（50%-150%）,。
Q：陰性對照（NTC/NCS）出現(xiàn)信號怎么辦,？
A：可能是交叉污染或試劑失效，建議更換吸頭,、分區(qū)操作,，并檢查試劑有效期。
Q：標曲擴增效率不達標如何處理,？
A：優(yōu)化引物探針濃度,，確保標準品稀釋準確，避免反復凍融,。
Q：如何選擇ROX參比染料,？
A：參照說明書中的機型適配表，或聯(lián)系技術支持獲取定制建議,。
- 未開封試劑盒：-20℃保存,，有效期18個月。
- 開封后：避免反復凍融,，ROX染料需嚴格避光,。
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