CryoStor® CS10是一種無血清、即用型細(xì)胞凍存液,,專為細(xì)胞和組織的低溫保存設(shè)計(jì),,確保細(xì)胞在冷凍和解凍過程中保持高活性和功能完整性。以下是詳細(xì)的使用說明:
1. 產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱:CryoStor® CS10 (100-1061)
規(guī)格:通常提供 100 mL 瓶裝,。
儲(chǔ)存條件:2°C 至 8°C 冷藏保存,,避免冷凍。
有效期:見產(chǎn)品標(biāo)簽,,通常為 2 年,。
2. 使用前準(zhǔn)備
檢查外觀:確保液體清澈無沉淀,顏色為淡黃色至無色,。
恢復(fù)至室溫:從冰箱取出后,,靜置至室溫(約 15-30 分鐘)。
無菌操作:在超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作,,避免污染,。
3. 細(xì)胞凍存步驟
(1)細(xì)胞準(zhǔn)備
細(xì)胞狀態(tài):確保細(xì)胞處于健康狀態(tài),活率 >90%,。
細(xì)胞計(jì)數(shù):用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),,調(diào)整細(xì)胞密度至 1×10^6 至 1×10^7 cells/mL。
離心收集:將細(xì)胞懸液離心(如 300×g,,5 分鐘),,棄上清。
(2)重懸細(xì)胞
加入 CryoStor® CS10:根據(jù)細(xì)胞沉淀量,,加入適量 CryoStor® CS10,,輕輕吹打混勻,。
分裝:將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中,每管 1-2 mL,。
(3)冷凍
程序降溫:
使用程序降溫盒或程序降溫儀,,以-1°C/min的速率降溫至 -80°C。
若無程序降溫設(shè)備,,可將凍存管放入異丙醇降溫盒,,置于 -80°C 冰箱過夜。
轉(zhuǎn)移至液氮:24 小時(shí)后,,將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存,。
4. 細(xì)胞解凍步驟
(1)快速解凍
水浴解凍:將凍存管從液氮中取出,迅速放入 37°C 水浴,,輕輕搖晃至完quan解凍(約 1-2 分鐘),。
避免過熱:解凍后立即從水浴中取出,,避免高溫?fù)p傷細(xì)胞,。
(2)洗滌細(xì)胞
稀釋 DMSO:將解凍的細(xì)胞懸液緩慢加入預(yù)熱的完quan培養(yǎng)基中(如 10 倍體積),輕輕混勻,。
離心:300×g 離心 5 分鐘,,棄上清。
重懸:用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,,進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn),。
5. 注意事項(xiàng)
DMSO 濃度:CryoStor® CS10 含 10% DMSO,部分細(xì)胞可能對(duì) DMSO 敏感,,需優(yōu)化濃度,。
無菌操作:全程避免污染,尤其是分裝和解凍步驟,。
解凍速度:快速解凍以減少冰晶損傷,。
細(xì)胞密度:凍存時(shí)細(xì)胞密度不宜過高或過低,推薦 1×10^6 至 1×10^7 cells/mL,。
6. 適用細(xì)胞類型
干細(xì)胞:如間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),、造血干細(xì)胞(HSCs)。
免疫細(xì)胞:如 CAR-T 細(xì)胞,、NK 細(xì)胞,。
原代細(xì)胞:如肝細(xì)胞、神經(jīng)元,。
細(xì)胞系:如 HEK293,、CHO 細(xì)胞。
7. 常見問題解答
(1)CryoStor® CS10 是否可以稀釋,?
不建議稀釋,,以免影響凍存效果,。若需降低 DMSO 濃度,可選擇 CryoStor® CS5(含 5% DMSO),。
(2)凍存后細(xì)胞存活率低怎么辦,?
檢查細(xì)胞狀態(tài):確保凍存前細(xì)胞健康。
優(yōu)化凍存密度:調(diào)整至推薦范圍(1×10^6 至 1×10^7 cells/mL),。
檢查凍存程序:確保降溫速率和解凍速度符合要求,。
(3)CryoStor® CS10 是否可以用于組織凍存?
可以,,適用于小組織塊的低溫保存,,但需根據(jù)組織類型優(yōu)化凍存條件。
總結(jié)
CryoStor® CS10是一款高效,、無血清的細(xì)胞凍存液,,適用于多種細(xì)胞類型的低溫保存。通過規(guī)范的操作步驟和注意事項(xiàng),,可確保細(xì)胞在冷凍和解凍過程中保持高活性和功能完整性,。
STEMCELL CryoStor® CS10代理:柏萊源(天津)生物科技有限公司
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