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細(xì)胞污染的原因都有哪些,?如何處理呢?

閱讀:1289      發(fā)布時(shí)間:2024-11-14
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細(xì)胞污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的問題,,它會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。以下是細(xì)胞污染的主要原因和相應(yīng)的處理方法:

一、細(xì)胞污染的原因
1. 操作環(huán)境不潔凈
   -空氣因素:細(xì)胞培養(yǎng)室的空氣質(zhì)量差是導(dǎo)致污染的常見因素之一,。如果沒有安裝高效空氣過濾器(HEPA),,外界空氣中的微生物(如細(xì)菌、真菌孢子)就容易進(jìn)入培養(yǎng)環(huán)境。此外,,人員頻繁進(jìn)出培養(yǎng)室,、通風(fēng)系統(tǒng)不完善等也會增加空氣中微生物的含量。
  - 臺面和儀器設(shè)備:細(xì)胞培養(yǎng)操作通常在超凈工作臺中進(jìn)行,,但如果超凈工作臺的濾網(wǎng)長時(shí)間未更換,、紫外燈殺菌不che底或者操作臺面在使用前未進(jìn)行充分清潔和消毒,表面殘留的微生物就會污染細(xì)胞,。另外,,培養(yǎng)箱、離心機(jī)等儀器設(shè)備內(nèi)部如果沒有定期清潔和消毒,,也會成為污染源,。
2. 實(shí)驗(yàn)用品污染
  - 培養(yǎng)基和試劑:培養(yǎng)基的原材料、配制過程或者儲存條件不當(dāng)都可能導(dǎo)致污染,。例如,,使用了過期的試劑、培養(yǎng)基在配制后沒有及時(shí)滅菌或者滅菌不che底,,就會引入細(xì)菌,、真菌等微生物。此外,,血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的添加成分,,血清來源的動(dòng)物如果本身攜帶病原體,也會污染培養(yǎng)基,。
   - 耗材:培養(yǎng)瓶,、移液管、離心管等耗材在生產(chǎn)過程中如果沒有經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,,可能會帶有微生物,。或者在使用前,,這些耗材沒有進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚?,如高溫滅菌、環(huán)氧乙烷滅菌等,,也會造成污染,。 3. 細(xì)胞來源污染
  - 從其他實(shí)驗(yàn)室獲取的細(xì)胞株如果沒有經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測,可能本身就攜帶微生物或者病毒,。另外,,在原代細(xì)胞分離過程中,如果取材的組織或器官沒有進(jìn)行che底的消毒處理,,也會將外界的污染物引入細(xì)胞培養(yǎng)體系,。
4. 操作人員操作不當(dāng)
  - 無菌操作意識不足:操作人員沒有嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范是導(dǎo)致細(xì)胞污染的重要人為因素。例如,在打開培養(yǎng)瓶,、移液等操作過程中,,沒有在酒精燈火焰附近進(jìn)行,使微生物有機(jī)會進(jìn)入培養(yǎng)體系,;或者操作時(shí)雙手沒有進(jìn)行充分消毒,,將手上的細(xì)菌或真菌帶入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。
  - 交叉污染:在同時(shí)處理多種細(xì)胞株時(shí),,如果沒有更換移液器槍頭,、沒有對使用的工具(如鑷子、剪刀)進(jìn)行充分消毒,,可能會導(dǎo)致細(xì)胞株之間的交叉污染,,使一種細(xì)胞株中的微生物傳播到另一種細(xì)胞株中。

二,、細(xì)胞污染的處理方法
1. 細(xì)菌污染處理
  - 觀察和判斷:細(xì)菌污染通常比較容易觀察到,,在顯微鏡下可以看到細(xì)胞培養(yǎng)液變渾濁,有大量的細(xì)菌在游動(dòng),。污染的細(xì)胞形態(tài)可能會發(fā)生改變,,如細(xì)胞腫脹、破裂等,。
  - 處理措施:一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染,,最hao的做法是立即丟棄受污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基,以防止細(xì)菌傳播到其他培養(yǎng)細(xì)胞,。如果細(xì)胞非常珍貴,,可以嘗試使用抗生素進(jìn)行處理,但成功率較低,。首先要確定污染的細(xì)菌種類,,通過革蘭氏染色等方法初步判斷是革蘭氏陽性菌還是革蘭氏陰性菌,然后選擇針對性的抗生素,。例如,,對于革蘭氏陽性菌,可以使用青霉素,、鏈霉素等;對于革蘭氏陰性菌,,可以使用慶大霉素,、卡那霉素等。將抗生素加入到新鮮的培養(yǎng)基中,,按照合適的濃度(一般根據(jù)抗生素的說明書和經(jīng)驗(yàn)確定)和細(xì)胞一起培養(yǎng),,觀察細(xì)胞狀態(tài)是否有所改善。
2. 真菌污染處理
  - 觀察和判斷:真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀的菌絲或者圓形的酵母菌。受污染的培養(yǎng)瓶內(nèi)表面可能會出現(xiàn)白色,、黑色或綠色的菌斑,,培養(yǎng)基也可能會變色。
  - 處理措施:和細(xì)菌污染類似,,一般建議直接丟棄受污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基,。如果要嘗試挽救,可使用抗真菌藥物,,如兩性霉素B,、氟康唑等。將藥物加入到新鮮培養(yǎng)基中,,不過真菌污染比細(xì)菌污染更難處理,,挽救成功的概率較低。
3. 支原體污染處理
  - 觀察和判斷:支原體污染比較難以察覺,,因?yàn)橹гw體積很小,,在普通顯微鏡下不容易觀察到。但是支原體污染會影響細(xì)胞的生長,、代謝和基因表達(dá)等,。可以通過專門的支原體檢測試劑盒(如PCR檢測試劑盒,、熒光染色檢測試劑盒等)來確定是否存在支原體污染,。
  - 處理措施:如果檢測到支原體污染,有幾種處理方法,。一種是使用抗生素,,如環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素等,,將其加入培養(yǎng)基中處理一段時(shí)間,。另一種是采用物理方法,如將細(xì)胞在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)代,,然后反復(fù)凍融細(xì)胞,,使支原體失去活性。還可以使用專門的支原體清除試劑來處理細(xì)胞,。
4. 交叉污染處理
  - 觀察和判斷:如果細(xì)胞形態(tài),、生長特性等突然發(fā)生改變,或者在進(jìn)行基因表達(dá)分析等實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的基因特征與預(yù)期不符,,就可能存在交叉污染,。
  - 處理措施:如果懷疑有交叉污染,首先要停止細(xì)胞的使用,,然后通過細(xì)胞鑒定技術(shù)(如短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)分析,、染色體核型分析等)來確定細(xì)胞的真實(shí)身份,。如果確實(shí)發(fā)生了交叉污染,最好重新獲取正確的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng),。


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