美國(guó)AAT Bioquest公司
前身是ABD Bioquest,,Inc. 簡(jiǎn)稱(chēng)AATbio,是一家為從事生命科學(xué)研究,、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家提供研發(fā),、生產(chǎn)和銷(xiāo)售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域,,包括吸收(顏色),,熒光和發(fā)光技術(shù)。
AAT Bioquest產(chǎn)品系列
1,、用于標(biāo)記小藥物分子和生物聚合物(如蛋白質(zhì),,核酸和碳水化合物)的反應(yīng)熒光和發(fā)光探針,生物素和標(biāo)簽酶
2,、用于檢測(cè)蛋白質(zhì),,核酸和活細(xì)胞的熒光和發(fā)光探針
3、用于檢測(cè)多種酶的熒光和發(fā)光探針,,特別是水解和氧化還原酶
4,、開(kāi)發(fā)用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的試劑
5、生理和神經(jīng)學(xué)探針,,如鈣指示劑和膜電位探針
AAT Bioquest產(chǎn)品列表
抗體 | 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗體等 |
生化檢測(cè) | 酶檢測(cè) |
核酸檢測(cè) | |
蛋白生化 | |
小分子檢測(cè) | |
結(jié)構(gòu)單元 | 交聯(lián)劑 |
Oligo合成 | |
多肽合成 | |
反應(yīng)性探針 | |
細(xì)胞檢測(cè) | 細(xì)胞生物學(xué) |
免疫學(xué) | |
微生物學(xué) | |
神經(jīng)生物學(xué) | |
HTS檢測(cè) | 細(xì)胞分析 |
GPCR | |
離子通道 | |
標(biāo)記探針 | 生物素及衍生物 |
傳統(tǒng)標(biāo)記用染料 如Cyanines,、Rhodamines等 | |
新型標(biāo)記用染料 如iFluor、mFluor系列染料和試劑盒 |
關(guān)于熒光染料:
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類(lèi)親脂性熒光染料家族,,用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織,。這是一類(lèi)環(huán)境敏感型熒光染料,當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時(shí),,其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng),。它們具有很高的淬滅系數(shù),,偏光依賴(lài)性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中,,這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散,,導(dǎo)致在其最佳濃度條件下,將整個(gè)細(xì)胞染色,。
熒光顏色
DiI(橙色 ) DiO(綠色)
DiD(紅色 ) DiR(深紅)
這些顏色為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具,。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用,其中,,DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā),,并且具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng),為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常優(yōu)質(zhì)的替代品,。
DiR在活體成像或者示蹤中非常有用,,因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織,并且在紅外光范圍內(nèi),,其本底熒光水平很低,。
使用方法:
1. DiD,DiO,,DiI,,DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備
(1) 配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液:
儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。
注意:未使用的儲(chǔ)存液保存在-20℃,,避免反復(fù)凍融
(2) 工作液制備:
用合適的緩沖液(如:無(wú)血清培養(yǎng)基,,HBSS或PBS)
稀釋儲(chǔ)存液,配制濃度為1~5 µM的工作液,。
注意:工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來(lái)配制,。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件,。
2. 懸浮細(xì)胞染色
(1) 懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中,。
(2) 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,
不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同,。
(3) 1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘,。
(4) 傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37的培養(yǎng)液,。
(5) 重復(fù)(3),,(4)步驟兩次以上。
3. 粘壁細(xì)胞的染色
(1)使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),。
(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過(guò)量培養(yǎng)液,,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中,。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,,輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
(4)在37 培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,,不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同,。
(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基,。
4. 流式細(xì)胞儀的檢測(cè)
DiD,,DiO,DiI,,DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1,,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè),。
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