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美國AAT Bioquest公司

前身是ABD Bioquest,，Inc. 簡稱AATbio，是一家為從事生命科學研究,、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家提供研發(fā),、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領(lǐng)域,，包括吸收（顏色）,，熒光和發(fā)光技術(shù)。

AAT Bioquest產(chǎn)品系列

1,、用于標記小藥物分子和生物聚合物（如蛋白質(zhì),，核酸和碳水化合物）的反應(yīng)熒光和發(fā)光探針，生物素和標簽酶

2,、用于檢測蛋白質(zhì),，核酸和活細胞的熒光和發(fā)光探針

3、用于檢測多種酶的熒光和發(fā)光探針,，特別是水解和氧化還原酶

4,、開發(fā)用于信號轉(zhuǎn)導研究的試劑

5、生理和神經(jīng)學探針,，如鈣指示劑和膜電位探針

AAT Bioquest產(chǎn)品列表

關(guān)于熒光染料：   

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜和疏水性組織,。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料,，當它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時，其熒光強度顯著增強,。它們具有很高的淬滅系數(shù),，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細胞中,，這種染料會在細胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散,，導致在其最佳濃度條件下，將整個細胞染色,。

熒光顏色

DiI（橙色 ）   DiO（綠色）

DiD（紅色 ）  DiR（深紅）

這些顏色為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具,。DiO和DiI可以分別與標準的FITC和TRITC濾光器一同使用，其中,，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā),，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，為標記細胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常優(yōu)質(zhì)的替代品,。

使用方法：

1. DiD，DiO,，DiI,，DiR和DiS細胞膜染色液制備

  (1) 配置DMSO或EtOH 儲存液：

      儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

      注意：未使用的儲存液保存在-20℃,，避免反復凍融

  (2) 工作液制備：

      用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基,，HBSS或PBS)

      稀釋儲存液，配制濃度為1～5 µM的工作液,。

     注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經(jīng)驗來配制,。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件,。

2. 懸浮細胞染色

  (1) 懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中,。

  (2) 37℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，

       不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同,。

  (3) 1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘,。

  (4) 傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37的培養(yǎng)液,。

  (5) 重復(3),，(4)步驟兩次以上,。

3. 粘壁細胞的染色

  (1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。

  (2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,，吸走過量培養(yǎng)液,，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

  (3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞,。

  (4)在37 培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同,。

  (5)吸干染料工作液,，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞,，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基,。

4. 流式細胞儀的檢測

  DiD,，DiO，DiI,，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1,，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測,。

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