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AAT Bioquest品牌:細(xì)胞膜熒光探針介紹

閱讀:842      發(fā)布時(shí)間:2024-5-29
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美國(guó)AAT Bioquest公司

image.png

前身是ABD Bioquest,,Inc. 簡(jiǎn)稱(chēng)AATbio,是一家為從事生命科學(xué)研究,、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家提供研發(fā),、生產(chǎn)和銷(xiāo)售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域,,包括吸收(顏色),,熒光和發(fā)光技術(shù)。


AAT Bioquest產(chǎn)品系列

1,、用于標(biāo)記小藥物分子和生物聚合物(如蛋白質(zhì),,核酸和碳水化合物)的反應(yīng)熒光和發(fā)光探針,生物素和標(biāo)簽酶

2,、用于檢測(cè)蛋白質(zhì),,核酸和活細(xì)胞的熒光和發(fā)光探針

3、用于檢測(cè)多種酶的熒光和發(fā)光探針,,特別是水解和氧化還原酶

4,、開(kāi)發(fā)用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的試劑

5、生理和神經(jīng)學(xué)探針,,如鈣指示劑和膜電位探針

AAT Bioquest產(chǎn)品列表

抗體

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗體

生化檢測(cè)

酶檢測(cè)

核酸檢測(cè)

蛋白生化

小分子檢測(cè)

結(jié)構(gòu)單元

交聯(lián)劑

Oligo合成

多肽合成

反應(yīng)性探針

細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞生物學(xué)

免疫學(xué)

微生物學(xué)

神經(jīng)生物學(xué)

HTS檢測(cè)

細(xì)胞分析

GPCR

離子通道

標(biāo)記探針

生物素及衍生物

傳統(tǒng)標(biāo)記用染料

如Cyanines,、Rhodamines等

新型標(biāo)記用染料

如iFluor、mFluor系列染料和試劑盒

關(guān)于熒光染料:   

染料DiI, DiO, DiD  DiR是一類(lèi)親脂性熒光染料家族,,用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織,。這是一類(lèi)環(huán)境敏感型熒光染料,當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時(shí),,其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng),。它們具有很高的淬滅系數(shù),,偏光依賴(lài)性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中,,這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散,,導(dǎo)致在其最佳濃度條件下,將整個(gè)細(xì)胞染色,。

熒光顏色


圖片

DiI(橙色 )   DiO(綠色)

圖片

DiD(紅色 )  DiR(深紅)


這些顏色為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具,。DiODiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用,其中,,DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā),,并且具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng),為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常優(yōu)質(zhì)的替代品,。

DiR在活體成像或者示蹤中非常有用,,因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織,并且在紅外光范圍內(nèi),,其本底熒光水平很低,。

使用方法:

1. DiD,DiO,,DiI,,DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備

  (1) 配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液:

      儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。

      注意:未使用的儲(chǔ)存液保存在-20℃,,避免反復(fù)凍融

  (2) 工作液制備:

      用合適的緩沖液(如:無(wú)血清培養(yǎng)基,,HBSS或PBS)

      稀釋儲(chǔ)存液,配制濃度為1~5 µM的工作液,。

     注意:工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來(lái)配制,。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件,。


2. 懸浮細(xì)胞染色

  (1) 懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中,。

  (2) 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,

       不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同,。

  (3) 1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘,。

  (4) 傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37的培養(yǎng)液,。

  (5) 重復(fù)(3),,(4)步驟兩次以上。


3. 粘壁細(xì)胞的染色

  (1)使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),。

  (2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過(guò)量培養(yǎng)液,,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中,。

  (3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,,輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

  (4)在37 培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,,不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同,。

  (5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基,。


4. 流式細(xì)胞儀的檢測(cè)

  DiD,,DiO,DiI,,DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1,,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè),。

柏萊源(天津)科技有限公司為廣大科研用戶(hù)提供AAT Bioquest品牌的全線(xiàn)產(chǎn)品

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