細胞凍存和復蘇是在細胞研究和生物醫(yī)學領域中常見的實驗技術，用于長期保存和重復使用細胞,。此步驟是細胞培養(yǎng)中的關鍵環(huán)節(jié),，直接影響細胞存活率和活力，關系到后續(xù)細胞實驗能否按照計劃有效地進行,。要想做好細胞凍存和復蘇，首先請牢記下面這四個字：慢凍快融,！慢凍快融,！慢凍快融！重要的事情說三遍,！
那么細胞實驗中為什么要“慢凍快融"呢,？
凍存細胞時，細胞內外環(huán)境中的水會形成冰晶,。如果直接將細胞凍存到 -196℃ 的液氮中,，由于凍結過程中胞外溶液中的水先結冰，使胞外溶液不斷濃縮,，引起細胞電解質升高,、滲透壓改變、脫水及蛋白質變性等,，會導致細胞受到機械性損傷,。
在冷凍保存時，細胞外環(huán)境中的水會結冰,。冷卻速度的不同會導致細胞由于滲透脫水而發(fā)生不同程度的收縮,。細胞外環(huán)境的滲透壓隨著水結成冰晶而不斷升高，冷卻速度越慢,，細胞內水分通過滲透作用移出細胞的時間就越長,。因此，非常緩慢的冷卻可能會導致細胞因過度脫水而死亡 (A),。而快速冷卻 (C) 會導致細胞內形成冰晶,，這會導致細胞在復溫時死亡。中間冷卻速度 (B) 則可以平衡滲透脫水和細胞內結冰形成的風險,，通?？梢詫崿F(xiàn)細胞存活率的大幅提升。
如果在凍存液中加入保護劑 (如 sigma 二甲基亞砜，DMSO),，可使冰點降低,，增加細胞滲透壓穩(wěn)定性。減緩慢速降溫過程中的脫水皺縮現(xiàn)象,，在緩慢凍結時減少冰晶的生成,，使細胞免受損傷[1]。
圖 1. 不同冷卻速度對細胞存活率的影響,。
而在復蘇時,，需要快速升溫，在 1-2 min 內融化并稀釋,，這時細胞內外還來不及形成較大的冰晶,，也不會使細胞長時間暴露在高濃度的電解質溶液中，從而避免細胞損傷,，提高細胞存活率,。
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