當(dāng)你導(dǎo)師安排養(yǎng)一個沒養(yǎng)過的細胞,，不知道用什么培養(yǎng)基的時候,，是否也在為選培養(yǎng)基而苦惱?面對DMEM培養(yǎng)基,、MEM培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基,、1640培養(yǎng)基等種類繁多的培養(yǎng)基時要怎么選擇呢,？
這種時候大家要一起記住：
ü 沒有什么培養(yǎng)條件是jue對正確的,；
ü 沒有什么細胞是咱養(yǎng)不活的,；
ü 參考文獻沒有那就不參考了；
ü 反正文獻也不一定是對的,；
但如果你的細胞沒STR鑒定過,，沒有親自原代分離過，還各種支原體立克次氏體污染,、黑膠蟲污染,，那你當(dāng)我沒說。我勸你盡快丟掉,！
讓我們先科普下培養(yǎng)基的選擇,。
目前合成培養(yǎng)基主要有：
→基礎(chǔ)培養(yǎng)基（常用）
→無血清培養(yǎng)基
→無蛋白培養(yǎng)基
→限定化學(xué)成分培養(yǎng)基
它們對血清添加量的要求各不相同，目前常用的是基礎(chǔ)培養(yǎng)基,?；A(chǔ)培養(yǎng)基是細胞生存的直接環(huán)境，為細胞生長提供豐富的營養(yǎng)物質(zhì),，并能調(diào)節(jié)培養(yǎng)體系的 pH值和滲透壓,。因此培養(yǎng)基的質(zhì)量和選擇對于細胞培養(yǎng)至關(guān)重要。
四種常用培養(yǎng)基的比較：
培養(yǎng)基類型 | 基本概述 | 組成成分 | 適用范圍 | 應(yīng)用范圍 |
RPMI-1640 Medium | RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動物,、特殊造血細胞,、正常或惡性增生的白細胞,，雜交瘤細胞的培養(yǎng),，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。 | 含有還原劑谷胱甘肽,、高濃度的維生素,，生物素。WEI生素B12以及PABA,。 | HeLa,、JurkatMCF -7 PC12PBMC、星形片質(zhì)細胞,，癌細胞K-562,、HL-60、Jurkat、Daudi,、IM-9等成淋巴細胞,、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。 | 尤其適用于懸浮細胞的培養(yǎng),。 |
MEM（Minimum Essential Medium） | 也稱最di必需培養(yǎng)基,，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素,。成分簡單,，可廣泛適應(yīng)各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養(yǎng)。 | 僅含有12種必需氨基酸,、谷氨酰胺和8種維生素,。 | MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細胞類型，而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng),。HeLaBHK-21 293 T,、HEP-2、HT-1080,、MCF-7,、成纖維細胞，原代大鼠星形膠質(zhì)細胞等,。 | 適于各種哺乳動物細胞的生長,。 |
DMEM高糖（標(biāo)準(zhǔn)型） | DMEM-高糖（標(biāo)準(zhǔn)型） 是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動物細胞培養(yǎng),更適合高密度懸浮細胞培養(yǎng),。 | DMEM培養(yǎng)基 與MEM培養(yǎng)基相比,，氨基酸的含量增加了2倍，維生素增加了4倍,，同時還增加了非必須氨基酸,、微量鐵離子以及丙酮酸鈉氨基酸。 | 適用于附著性較差,，但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養(yǎng),，也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞的培養(yǎng)。原代成纖維細胞 神經(jīng)元膠質(zhì)細胞,、HUV EC,、平滑肌細胞 HeLa293T、PC-12等細胞系,。 | DMEM高糖型:應(yīng)用于生長快,、粘附性低的細胞，雜交瘤的骨髓瘤細胞,、克隆細胞,、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞,、原代病毒宿主細胞，單一細胞,。 |
DMEM/ F12 | DMEM/F12培養(yǎng)基適于克隆密度的培養(yǎng),。F12培養(yǎng)基成分復(fù)雜，含有多種微量元素,，和DMEM以1：1結(jié)合，稱為DMEM/F12培養(yǎng)基（DME/F12medium）,，作為開發(fā)無血清配方的基礎(chǔ),，以利用F12含有較豐富的成分和DMEM含有較高濃度的營養(yǎng)成分為優(yōu)點。 | DMEM/F-12 DMEM培養(yǎng)基和Hams F-12培養(yǎng)基的1:1混合物,。 | 該培養(yǎng)基適用于血清含量較低條件下哺乳動物細胞培養(yǎng),。為了增強該培養(yǎng)基的緩沖能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES緩沖液,。MDCK 神經(jīng)膠質(zhì)細胞,、成纖維細胞、人內(nèi)皮細胞,、大鼠成纖維細胞等,。 | 1.廣泛用于支持多種哺乳動物細胞的生長； 2.無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ): 3.低血清含量下哺乳動 物細胞的培養(yǎng)以及克隆密度培養(yǎng),。 |
一、常見貼壁細胞培養(yǎng)條件：
1.接種濃度5×10*8個細胞/L,；
2.培養(yǎng)基：MEM或DMEM,，胎牛血清濃度：10%-80%；
3.37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱,；
4.起始培養(yǎng)減少震蕩，防止貼壁細胞脫落,。
二,、常見懸浮細胞培養(yǎng)條件：
1.原代培養(yǎng)時盡量去紅；
2.短期培養(yǎng)可選擇添加10%胎牛血清的RPMI 1640,；長期培養(yǎng)淋巴細胞時，要加入細胞因子,；
3.37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱；
4.每隔3天進行半量換液,。
本期內(nèi)容：DMEM、MEM、F12,、1640培養(yǎng)基區(qū)別在哪里?
下期內(nèi)容：如何讓細胞“凍"起來？
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