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無外泌體血清的制備步驟及注意事項(xiàng)

時(shí)間:2023/7/24閱讀:1552
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   無外泌體血清是一種可由多種細(xì)胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡,。經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn),其內(nèi)含有*的蛋白質(zhì)與核酸分子,,所含成份與其細(xì)胞來源密切相關(guān),,這也決定了無外泌體血清的功能特異性,如抗原提呈,、信號(hào)傳導(dǎo)或誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng),、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化,、細(xì)胞間通信,、腫瘤轉(zhuǎn)移等。目前,,無外泌體血清研究已經(jīng)成為臨床診斷與基礎(chǔ)醫(yī)生的新熱點(diǎn),。
  無外泌體血清制備步驟:
  1. 根據(jù)需要處理的血清體積選擇合適的轉(zhuǎn)子與超離管。
  2. 在超凈工作臺(tái),,將普通血清置于超離管中,,配平后,進(jìn)行熱封口,。
  3. 將封口后的超離管放于離心機(jī)轉(zhuǎn)子中,,并加入相應(yīng)適配器然后擰緊轉(zhuǎn)頭蓋。
  4. 設(shè)置離心程序:4℃,,120,000 ×g,,離心18小時(shí)(也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時(shí)),。
  5. 離心結(jié)束后,回收上清液,,為避免污染,,在超凈工作臺(tái)操作。
  6. 收集得到無外泌體血清,,并儲(chǔ)存于-20℃中備用。
  注意事項(xiàng)請(qǐng)注意了:
  1:離心后,,血清外泌體會(huì)富集在管底和管壁,;
  2:吸取血清時(shí),只吸取澄清部分的血清,,并且遠(yuǎn)離上圖中標(biāo)記的區(qū)域,;
  3:吸取70-80%的澄清的血清;(注意:動(dòng)作慢,,動(dòng)作輕)
  4:其余的渾濁血清留作正常細(xì)胞的的營(yíng)養(yǎng)物添加使用,,避免浪費(fèi)。
  5:如果覺得純度不夠,,再把離心后收集的血清做二次超速離心,。
  6:針對(duì)超速離心后的血清,必須進(jìn)行粒徑檢測(cè)(離心前樣品和離心后樣品),,該數(shù)據(jù)可以放到文章補(bǔ)充材料中,,用來證明無血清外泌體制備成功。
 

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