在發(fā)酵罐中培養(yǎng)大腸桿菌時，通常會使用特定的發(fā)酵培養(yǎng)基,，這些培養(yǎng)基根據(jù)大腸桿菌的生長需求和生產目的進行了優(yōu)化,。以下是一些常用的發(fā)酵培養(yǎng)基及其配方：大腸桿菌常用的發(fā)酵培養(yǎng)基主要包括以下幾種：
1. LB培養(yǎng)基（Lysogeny Broth）
LB培養(yǎng)基是常用的大腸桿菌培養(yǎng)基，適用于大腸桿菌的生長,、維持和大規(guī)模培養(yǎng),。
主要成分：
· 胰蛋白胨（Tryptone）：10 g/L
· 酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L
· 氯化鈉（NaCl）：10 g/L
特點：
· 營養(yǎng)豐富，適合大腸桿菌快速生長,。
· 可以添加瓊脂制成固體培養(yǎng)基,。
2. TB培養(yǎng)基（Terrific Broth）
TB培養(yǎng)基比LB培養(yǎng)基含有更多的營養(yǎng)成分，適合于高密度發(fā)酵,。
主要成分：
· 胰蛋白胨（Tryptone）：12 g/L
· 酵母提取物（Yeast Extract）：24 g/L
· 甘油（Glycerol）：4 mL/L
· 磷酸氫二鉀（KH2PO4）：12.54 g/L
· 磷酸二氫鉀（K2H2PO4）：8.56 g/L
· 氯化銨（NH4Cl）：3.4 g/L
特點：
· 提供更高的營養(yǎng)物質，適合于高密度細胞培養(yǎng),。
· 常用于蛋白質表達和大規(guī)模生產,。
3. SOB培養(yǎng)基：
適用于大腸桿菌蛋白表達，能夠提高蛋白產出量,，也用于配制SOC培養(yǎng)基,。
主要成分：
· 2% 胰蛋白胨
· 0.5% 酵母提取物
· 10 mM NaCl
· 2.5 mM KCl
· 10 mM MgCl2
· 10 mM MgSO4
· pH7.5
特點：
· 成分更復雜，營養(yǎng)更豐富,，氮含量高,，適合于分子生物學實驗。
4. SOC培養(yǎng)基：
主要用于大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備和轉化,，能夠提高轉化效率,，也適用于蛋白表達。
主要成分：
· 2% 胰蛋白胨
· 0.5% 酵母提取物
· 10 mM NaCl
· 2.5 mM KCl
· 10 mM MgCl2
· 10 mM MgSO4
· 20 mM D-葡萄糖
· pH7.5
特點：
· 在SOB培養(yǎng)基的基礎上增加了葡萄糖,，提供了直接的碳源,，有利于大腸桿菌生長。
5. M9培養(yǎng)基
M9培養(yǎng)基是一種基本培養(yǎng)基,，通常用于特定的實驗需求,，如營養(yǎng)缺陷型菌株的培養(yǎng)。
主要成分：
· 葡萄糖（Glucose）：4 g/L
· 氯化銨（(NH4Cl）：1 g/L
· 氯化鈉（NaCl）：0.5 g/L
· 磷酸氫二鉀（KH2PO4）：3g/L
· 磷酸二氫鈉（Na2H2PO4）：6.78 g/L
· 硫酸鎂（MgSO4）:0.241 g/L
· 氯化鈣（CaCl2）:0.011 g/L
特點：
· 營養(yǎng)成分較為簡單,，常用于基礎研究或需要嚴格控制營養(yǎng)條件的實驗,。
6. 2xYT培養(yǎng)基
2xYT培養(yǎng)基是LB培養(yǎng)基的變種，含有更高的營養(yǎng)成分,，適合于高密度培養(yǎng),。
主要成分：
· 胰蛋白胨（Tryptone）：16 g/L
· 酵母提取物（Yeast Extract）：10 g/L
· 氯化鈉（NaCl）：5 g/L
特點：
· 營養(yǎng)豐富，適合于高密度大腸桿菌培養(yǎng),。
補充物：
在大腸桿菌發(fā)酵過程中,，還可能需要添加以下補充物：
· 抗生素：用于選擇抗性菌株,。
· 誘導劑：如IPTG，用于誘導重組蛋白的表達,。
· 微量元素和維生素溶液：用于支持細胞生長,。
在發(fā)酵過程中，培養(yǎng)基的配方和條件（如pH,、溫度,、溶解氧等）需要根據(jù)具體的實驗目的和生產要求進行調整。比如：如果需要進行高密度發(fā)酵,，需要增加硫酸鎂的量,，補料加入合適酵母浸粉可以加提高發(fā)酵周期，加入硫酸銨可以提高菌濃,。發(fā)酵過程應在嚴格的無菌條件下進行,，并監(jiān)控發(fā)酵過程的各項參數(shù)，以確保發(fā)酵達到預期的結果,。
大腸桿菌發(fā)酵工藝開發(fā)流程通常包括以下幾個關鍵步驟：
1,、菌株的構建：
首先需要選擇一個優(yōu)良的菌株，包括基因工程路線設計,、菌株改造與篩選,、搖瓶條件摸索等。
2,、培養(yǎng)基的優(yōu)化：
培養(yǎng)基是大腸桿菌發(fā)酵工藝的重要組成部分,。需要根據(jù)不同菌株和產品要求調整培養(yǎng)基配方，對培養(yǎng)基成份比較了解,，可以進行DOE篩選,，主要成分包括碳源、氮源,、無機鹽和生長因子等的搭配比例,。
3、工藝參數(shù)優(yōu)化與控制：
溫度：大腸桿菌生長的最佳溫度通常為37℃,，但根據(jù)發(fā)酵目的和菌種特性,，可以適當調整溫度范圍。
pH值：大腸桿菌最適生長的pH值為7±0.2,。發(fā)酵過程中需要通過酸堿補料策略維持發(fā)酵液的pH值穩(wěn)定,。
溶氧（DO）：大腸桿菌的臨界溶解氧濃度范圍為20%~30%。溶氧不足會導致乙酸積累,，影響菌體生長,；溶氧過高則可能產生氧中毒現(xiàn)象。因此，需要通過調節(jié)攪拌轉速,、通氣量等參數(shù)來控制溶氧水平,。
補料策略：選擇補料分批式發(fā)酵，以實現(xiàn)大腸桿菌的高密度發(fā)酵和獲得更多的生物質,。補料過程中需要實時監(jiān)測發(fā)酵液中的養(yǎng)分消耗情況,，進行補料工藝的開發(fā)，確定補料種類與補料時間與補料量,。
發(fā)酵工藝開發(fā)過程中可以采用minitab或者JMP等類似軟件進行DOE的實驗方法設計,，以加快實驗過程，找到更好更穩(wěn)健的工藝參數(shù),。
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