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實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

　　1．掌握FISH技術(shù)的一般原理，及其基本實(shí)驗(yàn)方法,；　

　　2．了解FISH技術(shù)的發(fā)展概況,，以及應(yīng)用范圍。

實(shí)驗(yàn)原理

FISH是以分子雜交為基礎(chǔ),，應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)標(biāo)記核酸探針,，通過(guò)堿基互補(bǔ)的原理與靶DNA雜交,，在核中或染色體上顯示靶DNA序列位置的方法。FISH技術(shù)可分為四個(gè)步驟：樣品制備,、探針標(biāo)記,、雜交及其檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

　　1．材料染色體標(biāo)本或血涂片

　　2．儀器低溫高速離心機(jī),、熒光顯微鏡,、VELP漩渦混勻器、移液器,、恒溫水浴鍋,、培養(yǎng)箱、烤箱

實(shí)驗(yàn)方法與步驟　　

　　 1．探針混合與變性

　?。?）混合20～60ng標(biāo)記探針DNA和3～5μg鮭精DNA,。反應(yīng)后體積少于10μl，可直接凍干,；若體積較大,，可加1/20體積的3mol/L乙酸鈉和2倍體積100%乙醇沉淀DNA?；靹虿⒂?70℃30min,。在4℃，12000r/min離心10min,，棄上清,，沉淀物以300μl70%乙醇洗滌后在離心（同上），棄上清,，凍干,。

　　（2）將DNA重懸于5μl去離子的甲酰胺中,，室溫旋渦混勻3min,。

　　（3）加入5μl雜交緩沖液,，漩渦混勻器中混勻5min,。

　　（4）將DNA探針置于75℃水浴中變性5min,。迅速置于冰浴中5min,，備用?！?/p>

　　 2．樣本處理

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