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依賴核酸序列的擴增技術(shù)(NASBA)是在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù),,是由1對帶有T7啟動子序列的引物引導(dǎo)的連續(xù),、等溫、基于酶反應(yīng)的核酸擴增技術(shù),,反應(yīng)在41℃進(jìn)行,,可以在2h左右將模板RNA擴增約109倍,比常規(guī)PCR法高1000倍,不需特殊的儀器,。該技術(shù)一出現(xiàn)就被用于疾病的快速診斷和病人血清中HIV-1的定量檢測,。盡管RNA的擴增也可以使用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)(通過反轉(zhuǎn)錄形成單鏈DNA模板),NASBA相比則有自己的優(yōu)勢:可以在相對恒溫的條件下進(jìn)行(一般恒溫為41℃),。該技術(shù)用于醫(yī)學(xué)診斷,,相對傳統(tǒng)的PCR技術(shù)更為穩(wěn)定,準(zhǔn)確,。
多酶等溫快速擴增(Multienzyme lsothermal Rapid Amplification,,MIRA)技術(shù),一種模擬生物體內(nèi)正常核酸擴增過程,,在37°C條件下依靠多種功能蛋白協(xié)同作用下實現(xiàn)核酸的快速擴增,。
以上是近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展,,基于核酸擴增的診斷方法已大量建立并廣泛應(yīng)用于人類疾病的實驗室檢測中,,恒溫擴增技術(shù)便是其中一種,與其他的核酸擴增技術(shù)相比,,恒溫擴增有快速,、高效、特異的優(yōu)點且無需專用的設(shè)備,,所以它一經(jīng)出現(xiàn)就被許多學(xué)者認(rèn)為是一種有可能與PCR媲美的檢測方法,。當(dāng)前常見的等溫擴增技術(shù)有環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)、鏈替代等溫擴增技術(shù),、滾環(huán)等溫擴增技術(shù),、依賴解旋酶等溫擴增技術(shù)、依賴核酸序列等溫擴增技術(shù),、單引物等溫擴增技術(shù)和核酸快速等溫檢測放大等技術(shù),。為了更好地有選擇地開發(fā)利用這方面技術(shù),現(xiàn)就這些等溫擴增技術(shù)的原理,、特點及應(yīng)用進(jìn)行簡要總結(jié)。
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