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熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域:
1,、 核酸定量分析:
對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感,, 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測,,RNAi 基因失活率的檢測等,。
2、 基因表達(dá)差異分析:
比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 ( 如藥物處理,、物理處理,、化學(xué)處理等 ) ,特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證
3,、 SNP 檢測:
檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個(gè)體對不同疾病的易感性或者個(gè)體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義,,因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性,一旦SNP 的序列信息是已知的,,采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的 SNP 檢測將會(huì)變得簡單而準(zhǔn)確,。
4、 甲基化檢測:
甲基化同人類的許多疾病有關(guān),,特別是癌癥,, Laird 報(bào)道了一種稱作 Methylight的技術(shù),在擴(kuò)增之前先處理 DNA ,,使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,,而甲基化的胞嘧啶不受影響,用特異性的引物和 Taqman探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA ,,這種方法不僅方便而且靈敏度更高,。
醫(yī)學(xué)研究
5 、產(chǎn)前診斷:
人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療,,到目前為止,,還只能只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,,易為孕婦所接受。
6,、 病原體檢測:
采用熒光定量PCR檢測技術(shù)可以對淋球菌,、沙眼衣原體、解脲支原體,、人類乳頭瘤病毒,、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒,、肝炎病毒,、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測定,。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高,、取樣少、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)
7,、 藥物療效考核:
對乙型肝炎病毒 (HBV),、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達(dá),,干擾素治療作用不敏感,,而HCV低滴度,干擾素作用敏感,;在拉米夫定治療過程中,,HBV- DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,,則提示病毒發(fā)生變異
8,、 腫瘤基因檢測:
盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚,但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受,。癌基因的表達(dá)增加和突變,,在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR不但能有效地檢測到基因的突變,,而且可以準(zhǔn)確檢測癌基因的表達(dá)量,。目前用此方法進(jìn)行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因,、腫瘤 ER基因,、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測
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