以下是ELISA實(shí)驗(yàn)過程中遇到的問題解答，更多實(shí)驗(yàn)資訊可咨詢我司業(yè)務(wù)員,。天津睿創(chuàng)生物科技有限公司擁有自己的實(shí)驗(yàn)室,，備有專業(yè)的技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì)，長期致力于各種生物試劑,，細(xì)胞,，血清，ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售,，實(shí)驗(yàn)提供免費(fèi)代測服務(wù),，質(zhì)量問題包退換，并提供技術(shù)服務(wù),，如果您有實(shí)驗(yàn)上的問題歡迎前來咨詢,，為您提供專業(yè)的一對(duì)一技術(shù)指導(dǎo)。

1,、試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫,，會(huì)有什么影響？

如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫（20～25℃）,，可能會(huì)導(dǎo)致溫育時(shí)間不夠,，從而使OD值偏低,。

2.、移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔,，會(huì)造成什么后果,？

移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，都可能導(dǎo)致加樣量不足,，造成OD值偏低,。此外,，吸頭內(nèi)壁不清潔還可能導(dǎo)致非特異性吸附,，進(jìn)一步影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3,、操作順序顛倒或遺漏步驟,，會(huì)有什么后果？

如果操作順序顛倒或遺漏步驟,，很可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,，例如漏加酶結(jié)合物、顯色劑等,，使整塊ELISA板都不顯色,。

4、溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求,，會(huì)有什么影響,？

溫育時(shí)間不夠或溫育溫度未達(dá)到要求，都會(huì)影響反應(yīng)的進(jìn)行,，導(dǎo)致OD值偏低,。例如，保溫用的濕盒沒有預(yù)溫,，或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等,。

5、洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題,，會(huì)造成什么后果,？

洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈,、含有酶抑制物,、濃度過高等，都可能導(dǎo)致洗去特異性結(jié)合物,，使OD值偏低,。

6、洗板時(shí)沖擊力太大,、浸泡時(shí)間過長,、洗板次數(shù)過多,，會(huì)有什么影響？

這些操作都可能導(dǎo)致洗去結(jié)合在包被板的特異性結(jié)合物,，從而使OD值偏低,。

7、加完終止液后沒有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進(jìn)行讀數(shù),，會(huì)有什么影響,？

這可能導(dǎo)致檢測OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內(nèi)進(jìn)行讀數(shù),。

8,、酶標(biāo)儀檢測波長設(shè)定有誤，會(huì)有什么后果,？

如果酶標(biāo)儀檢測波長設(shè)定有誤,，例如選用的波長不是產(chǎn)物的敏感吸收峰，可能會(huì)導(dǎo)致OD值偏低或偏高,。

9,、陰性對(duì)照出現(xiàn)陽性結(jié)果，可能的原因是什么,？

陰性對(duì)照出現(xiàn)陽性結(jié)果可能是由于樣品,、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染,。此外,，抗體量過多導(dǎo)致非特異性結(jié)合也可能是一個(gè)原因。

10,、酶標(biāo)板整體背景高,，可能的原因是什么？

酶標(biāo)板整體背景高可能是由于底物孵育過程沒有避光,，導(dǎo)致背景信號(hào)增強(qiáng),。

11、復(fù)孔之間重復(fù)性差,，可能的原因是什么,？

復(fù)孔之間重復(fù)性差可能是由于加樣本及試劑量不準(zhǔn)、孔間不一致等原因造成的,。此外,，操作條件、人員等的不一致也可能導(dǎo)致重復(fù)性差,。

12,、陽性對(duì)照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么,？

陽性對(duì)照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時(shí)間或溫度不夠,、顯色反應(yīng)時(shí)間太短,、顯色液變質(zhì)或試劑過期、試劑稀釋有誤等原因造成的,。