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小鼠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞,。這里的組織主要指:組織器官,、外周血及胚胎等。由于小鼠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒生長(zhǎng)緩慢,,繁殖一定的代數(shù)停止生長(zhǎng),。所以一般認(rèn)為:培養(yǎng)的原代的1代和傳代到10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為酶聯(lián)免疫試劑盒培養(yǎng),。總結(jié)了小鼠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的提取的整個(gè)操作過(guò)程,,一起來(lái)看看吧,!
小鼠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的提取的整個(gè)操作過(guò)程:
1、整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行,,所有的器材要高壓消毒,。
2、根據(jù)BALB/c小鼠的體重,,用10ml/kg3%濃度的麻醉,;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,,也可以讓小鼠體毛浸濕,,后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。
3,、用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,,裝有PBS的注射器插入心尖,同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口,,緩慢推動(dòng)注射器,隨著心臟的跳動(dòng),,將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái),。
4、取出小鼠的肺部組織,,小鼠ELISA試劑盒將肺組織切成小米粒樣的大小,,置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。
5,、將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,,4度過(guò)夜,小鼠處理前,,將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,,消化4個(gè)小時(shí),。
6、消化4小時(shí)后,,加入RPMI1640培養(yǎng)基(有10%血清,、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子)10ml(添加培養(yǎng)基,,可以是正常培養(yǎng)時(shí)的2倍量),,繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(繼續(xù)培養(yǎng)的時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。
7、24小時(shí)后,,取出肺組織,,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液,。
8,、小鼠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的提取和培養(yǎng)是很慢的過(guò)程,一般需等到24小時(shí)后,,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,,一周到兩周后才會(huì)看到鵝卵石樣的排列情況。
9,、小鼠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒2-3天換液一次,,因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)形成單層時(shí),會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象,。所以,,內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)接近單層時(shí)就可以傳代了,不要等到長(zhǎng)得非常滿,。
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