ELISA試劑盒檢測(cè)常用方法及順序

ELISA，即“酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)",，是一種常用的生物分析技術(shù),，通過(guò)檢測(cè)樣品中特定蛋白質(zhì)的含量,，來(lái)幫助研究人員在生命科學(xué)中開(kāi)展多種實(shí)驗(yàn),。然而,，要完成ELISA實(shí)驗(yàn)需要用到一整套試劑盒，其中常用的試劑盒種類有很多,。本文將從試劑盒的分類,、用途、常用步驟,、質(zhì)量控制4個(gè)方面,，詳細(xì)介紹在科研實(shí)驗(yàn)中常使用的ELISA試劑盒。

一,、試劑盒的分類

根據(jù)檢測(cè)原理不同,，ELISA試劑盒可分為直接ELISA試劑盒、間接ELISA試劑盒,、夾心ELISA試劑盒,、競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒、免疫層析試劑盒,、光學(xué)顯微鏡試劑盒等多種,。其中，直接ELISA試劑盒是最jian便的一種,，也是最早應(yīng)用的一種,；夾心ELISA試劑盒則是目前應(yīng)用zui廣fan的類型，采用夾心法可以很精確地定量測(cè)定某種蛋白質(zhì)的含量,；競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒用來(lái)測(cè)定低濃度的多肽激素和抗體,，具有更高的靈敏度。在選擇試劑盒時(shí)需要了解其適用范圍,、檢測(cè)靈敏度和穩(wěn)定性等指標(biāo),，確定是否符合實(shí)驗(yàn)的需要。

二,、試劑盒的用途

ELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)診斷、藥物研發(fā),、食品安全,、環(huán)境保護(hù)等多個(gè)領(lǐng)域。例如,，在生命科學(xué)領(lǐng)域中,，科研人員可以利用它來(lái)測(cè)定某種蛋白質(zhì)的含量、研究免疫系統(tǒng)和感染病毒的機(jī)制,。在醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域中,，ELISA試劑盒常被用于檢測(cè)血清中腫瘤標(biāo)志物的含量。在食品安全領(lǐng)域中,，ELISA試劑盒可用來(lái)檢測(cè)食品中的殘留物和污染物等,。

三、ELISA試劑盒的常用順序

1.涂覆

首先,，將特定抗原涂覆在微孔板表面,，一般選擇質(zhì)地緊密、透亮,、表面光潔的微孔板,?？乖暮俊⑼扛矔r(shí)間和溫度都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果,。

2.阻斷

涂覆后的微孔板表面還有空隙,，容易發(fā)生非特異性吸附，從而影響檢測(cè)結(jié)果,。因此,，需要在涂覆過(guò)程中加入較低濃度的牛血清蛋白（BSA）、明膠等蛋白,，阻塞未被試劑占據(jù)的空位,。

3.樣品加入

加入待測(cè)試的樣品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。若是多個(gè)樣品,，需分別在不同的孔板中加入,。

4.加入檢測(cè)抗體

加入特異性檢測(cè)抗體，可與樣品中特定蛋白質(zhì)結(jié)合,。

5.加入二抗及底物

加入二抗和顯色底物,，可以將檢測(cè)抗體和樣品中的目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，產(chǎn)生一定的信號(hào),，如顏色,。

6.結(jié)果判讀

通過(guò)光譜分析或比色法測(cè)量各孔位色素的吸收率或發(fā)光強(qiáng)度，從而計(jì)算出樣品中含有的目標(biāo)蛋白質(zhì)含量,。

四,、質(zhì)量控制

ELISA試劑盒在使用過(guò)程中應(yīng)該注意質(zhì)量控制。比如,，在樣品和試劑的制備中要求熟練掌握各種實(shí)驗(yàn)技巧,，保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性；在檢測(cè)過(guò)程中,，要按程序和結(jié)果質(zhì)量要求執(zhí)行實(shí)驗(yàn),，符合實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范。同時(shí),，在使用過(guò)程中嚴(yán)格控制卡扣,、儲(chǔ)存試劑、保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境等方面也要注意給予齊全的保障,，避免實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的誤差干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

綜上所述，ELISA試劑盒是生物分析技術(shù)的重要代表,，其分類和用途各有側(cè)重,，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中掌握常用步驟和質(zhì)量控制，可以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠,，為科研人員的實(shí)驗(yàn)研究提供重要幫助,。