ELISPOT(Enzyme-linked Immunospot Assay)全名為酶聯(lián)免疫斑點檢測,結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),,能夠檢測到單個細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子情況,。
ELISPOT 實驗使用 PVDF 膜為底的 96 孔板,包被上特異性的單克隆抗體來捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,。在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入待檢測的細(xì)胞和抗原刺激物進行培養(yǎng),,在刺激物的刺激下,T細(xì)胞就會在對應(yīng)的時間段分泌對應(yīng)的細(xì)胞因子,。細(xì)胞因子被包被在膜上的抗體所捕獲,。洗去細(xì)胞,被捕獲的細(xì)胞因子可以與生物素標(biāo)記的第二抗體結(jié)合,,然后用酶標(biāo)親和素與生物素結(jié)合,,進行化學(xué)酶聯(lián)顯色,就可以在膜的局部形成一個個圓形的斑點,,每一個斑點就對應(yīng)了當(dāng)初一個分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞,。統(tǒng)計膜上的斑點的數(shù)目,再除以當(dāng)初加入孔內(nèi)的細(xì)胞總數(shù),,就可以計算出陽性細(xì)胞的百分比,。