液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究“正確使用"和經(jīng)驗(yàn),。
液相工作者接觸最多的是流動(dòng)相,，也就是流動(dòng)相，是造成液相色譜各種問題的最主要源頭,。
液相色譜儀最常見的故障一是堵,，二是漏。下面就這兩點(diǎn)分別展開討論,。（注：流動(dòng)相以甲醇為例,，色譜柱以C18為例）“堵"的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢,。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端,，
最主要原因就是流動(dòng)相里有雜質(zhì),，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌。
“堵"的原因之一：配制流動(dòng)相時(shí)細(xì)菌污染,。
首先我們要認(rèn)識(shí)到,，一般的國產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題,。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì),，也能在液相流路系統(tǒng)最前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的,，是水中的細(xì)菌,。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會(huì)長菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見,，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,，造成柱子很快報(bào)廢。
時(shí)間過久,濾頭黏附細(xì)菌導(dǎo)致泵液不準(zhǔn) |
解決它的方法很簡單,，就是確保水的可靠性,。這里有兩種方式推薦：
（1）購買實(shí)驗(yàn)室專用純水機(jī)，
既方便又可靠,，質(zhì)量也放心,。缺點(diǎn)就是價(jià)格不菲。
（2） 成箱購買市售品牌純凈水,，如500ml 一支的怡寶或娃哈哈,，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。
這里特別指出一個(gè)細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上,，凡談到配制流動(dòng)相都會(huì)談到最后有一個(gè)過濾的步驟,。
從使用的實(shí)際情況來看有幾點(diǎn)需要注意:
（1）流動(dòng)相過濾實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專瓶專用，容易造成的交叉污染,，對(duì)于配比復(fù)雜的流動(dòng)相影響更大,。所以用完后一定要沖洗干凈.用前不放心的話也可以沖洗下.
（2）流動(dòng)相過濾經(jīng)濟(jì)成本比較高。買一套過濾裝置要3000多元,，且過濾器是比較容易損壞的設(shè)備,。過濾片成本高，有些進(jìn)口的一片就要幾十元,。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算,，過濾片的成本會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。并且在使用過濾片時(shí),有些會(huì)造成流動(dòng)相的二次污染,原因在于不合格的過濾片.
（3）流動(dòng)相過濾耗費(fèi)時(shí)間長,。使用溶劑過濾器有一個(gè)預(yù)清洗,、裝備、使用,、用后清洗,，晾干的過程,，至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視,。
“堵"的原因之二：使用流動(dòng)相時(shí)的細(xì)菌污染,。
指的是：流動(dòng)相剛開始沒有長菌，在使用時(shí)卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染,。這主要是在使用多元液相色譜儀時(shí)的一種不良使用習(xí)慣造成的。
舉例子：50％的甲醇水流動(dòng)相,，有兩種使用方式,。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇,，流路B放純水,。
從單純實(shí)驗(yàn)效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡單,，不需要實(shí)驗(yàn)者另個(gè)計(jì)算配比混合,，其次就是比例準(zhǔn)確，能得到保留時(shí)間重復(fù)性的實(shí)驗(yàn)效果,。
但是,，它有一個(gè)致命的缺陷，就是純水在流動(dòng)相瓶中幾天時(shí)間就會(huì)長細(xì)菌（很多情況下不僅僅用純水作流動(dòng)相,，而是用緩沖鹽溶液,，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，細(xì)菌長得更迅速）,，一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快,。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗(yàn)都要用新制備的純水，更要求在每次實(shí)驗(yàn)后把水相換掉,，換成甲醇沖洗干凈,，這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識(shí)不強(qiáng)，就是意識(shí)到了但多次使用中總有一兩次會(huì)遺漏,，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響,。因?yàn)橐合嗌V柱的堵塞是不可逆的。
"堵"的原因之三：不適當(dāng)操作,。
常見問題的有以下幾種：
（1）在更換零件時(shí)選擇的型號(hào)有誤,，或者管線材質(zhì)不達(dá)標(biāo),接口不是很匹配，在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞,。
（2）樣品處理液凈化得不干凈,，長期會(huì)在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
（3）在使用手動(dòng)六通閥時(shí),，有些人可能由于手勁小的原因,，轉(zhuǎn)動(dòng)的不到位,，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值.自動(dòng)進(jìn)樣的情況類似,若六通閥卡死,也會(huì)形成死堵,導(dǎo)致超壓
“堵"的原因講了不少,，現(xiàn)介紹查堵的方法,。
在發(fā)生“堵"的現(xiàn)象后，就需要找出原因,，主要是什么位置發(fā)生了“堵",。注意，絕大多數(shù)情況下,，整個(gè)系統(tǒng)只會(huì)有一個(gè)地方發(fā)生堵塞,。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細(xì)觀察壓力數(shù)值,，如果某一個(gè)部件（柱子除外）裝上和拆下時(shí)的壓力差別很大,，即基本可以判定此配件堵塞。至于柱的堵塞,，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷,。建議首先更換柱子,看壓力是否依然很大.然后是柱前管線,依次往前排查
下面再談一下“漏"的問題。
液相色譜儀從流動(dòng)相瓶到廢液瓶之間的流路是一個(gè)全封閉體系,，內(nèi)部壓力很高,，但外部卻能保證一滴不漏。如果某個(gè)部件發(fā)生了漏液,，那就是故障所在,。
漏液的原因分兩種：
（1） 接觸硬件不當(dāng)。
在更換零件如流路管或柱子時(shí),，換的接頭接口不匹配,，造成漏液。要注意不同公司的柱子接頭很多是不同的,。當(dāng)然選用PEEK接頭是一個(gè)較好的解決方法,，不僅通用性好，而且靠手?jǐn)Q就能保證不漏液,。值得注意的是現(xiàn)在有很多廠家都出了手?jǐn)Q管線,只能用手?jǐn)Q,用扳手力量過大會(huì)造成損壞.所以要把握好力度,避免擰的太緊或太松.
螺紋沒有對(duì)好,用力過大形變導(dǎo)致漏夜 |
形變導(dǎo)致漏夜 |
（2） 使用儀器不當(dāng)
如果是輸送泵漏液,，最常見的原因就是在活塞位置緩沖鹽析出造成。
之間有液體漏出 |
轉(zhuǎn)子磨損 |
析出的原因有兩個(gè),，一是使用緩沖鹽溶液時(shí)突然加入了純甲醇而析出,，這種錯(cuò)誤很容易避免，在使用儀器時(shí)要注意目前系統(tǒng)的流動(dòng)相是什么,，如果是緩沖鹽,，不能直接換純有機(jī)相，會(huì)導(dǎo)致鹽析出，引起系統(tǒng),，色譜柱堵塞,。需要先用10%的有機(jī)相水過度。再換純有機(jī)相,。另一原因是在用緩沖鹽溶液（不論甲醇含量有多少）作流動(dòng)相時(shí),，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后沒有換甲醇水沖洗，使得微滲的流動(dòng)相干燥形成晶體造成,。為了避免此種現(xiàn)象出現(xiàn),，在使用緩沖鹽做流動(dòng)相后一定要先用90%的水,1ml/min 的流速來沖洗系統(tǒng)至少30分鐘，把緩沖鹽置換出去,，再用純有機(jī)相沖洗30分鐘,，把系統(tǒng)保存在純有機(jī)相中，起到保護(hù)系統(tǒng)和柱子的作用,。
在實(shí)際的使用過程中，試驗(yàn)人員往往很忙,，有大量的項(xiàng)目要做,，沒時(shí)間沖洗儀器，都是拿過來就用,，用完就不管了,，導(dǎo)致問題的出現(xiàn)，然后排查,，維修等浪費(fèi)更多的時(shí)間,，得不償失。所謂磨刀不誤砍柴功,，工欲善其事,，必先利其器。希望大家都能培養(yǎng)良好的使用習(xí)慣,，讓儀器設(shè)備能發(fā)揮出最大的作用,，謝謝大家！
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