高壓滅菌器滅菌效果驗證

微生物實驗室最少不了的實驗儀器之一就是滅菌器，一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器,。規(guī)程要求實驗設(shè)備應(yīng)定期進行檢查和/或檢定（加貼標志）,、維護和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全,。您的滅菌器有沒有做過類似的校準或驗證呢,？具體方法是怎樣的呢？下面就一起來看看高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關(guān)內(nèi)容吧,。

高壓滅菌器滅菌效果驗證一般有化學(xué)指示劑法,、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法,，每種方法的原理都是相似的,，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據(jù)自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進行驗證,。

一,、化學(xué)指示劑法原理：

化學(xué)指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據(jù)這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數(shù),。一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶,，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。它是由熱敏化學(xué)物質(zhì)與顯色劑及漆輔料制成油墨,，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成,。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm,，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果,；在121℃持續(xù)20min或130℃持續(xù)4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會變黑,，成為黑色線條,；如變色不均勻，可認為該包裹不符合滅菌條件,。

二,、留點溫度計法原理：

留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統(tǒng)體溫計相似,，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度,。驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部,，滅菌結(jié)束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致,。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求,，因此是滅菌器驗證比較低的標準,。

三、自制測溫管法原理：

利用一些化學(xué)藥品受熱熔化后再冷卻,，晶體的外形不同的特性,，把化學(xué)藥品密封在小玻璃管內(nèi)，滅菌時放在滅菌器里,，滅菌完后觀察晶體的形狀,，就可以判斷溫度是否達標。常用的試劑是苯甲酸,，苯甲酸的熔點為121-123℃,，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內(nèi)放進滅菌器,，滅菌結(jié)束就可以觀察苯甲酸的狀態(tài)來驗證滅菌器是否達到了要求溫度,。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度,，對滅菌時間是否達到要求無法判斷,。

四,、生物指示劑法原理：

利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果,。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強,，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌,，驗證滅菌器能否達到滅菌要求,。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片,、菌片和培養(yǎng)基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前,、中,、后和上層、中層的中央點,。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中,，55-60℃培養(yǎng)2-7天，若培養(yǎng)基澄清,、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死,，滅菌器滅菌效果良好；如果培養(yǎng)基黃色渾濁,，說明芽孢未被殺滅,，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此,。

目前實驗室還常用商品化的生物指示管,，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養(yǎng)液玻璃小管,，將指示管放在滅菌容器內(nèi)的各個點上,，高壓滅菌后，將管中盛培養(yǎng)液的玻璃管擠碎,，培養(yǎng)液從內(nèi)部的小管中被放出,，放入56℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，同時做陽性對照,。若是滅菌器滅菌效果不合格,，指示管內(nèi)的芽孢復(fù)活后生長會改變?nèi)鉁念伾侨鉁優(yōu)辄S色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內(nèi)芽孢被滅活不再生長,，肉湯仍舊是原來的紫色,。對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關(guān)標準嚴格的要求驗證的頻次,，但是實驗室應(yīng)當自行制定驗證頻次規(guī)定,，并嚴格按照要求進行,。從操作性和驗證結(jié)論兩個方面出發(fā)，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管,，因為這兩種方法操作簡單,，可以對滅菌效果進行全面的驗證。

附：滅菌時的注意事項（一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣）

使用高壓蒸氣滅菌器時,，首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時,，排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后,，才可關(guān)閉排氣孔,。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時，則壓力表上雖已達到了某一壓力值,，但器內(nèi)之溫度仍未達到相應(yīng)之度數(shù),。存留的空氣越多，則二者相差也越大,，器內(nèi)溫度不足,，滅菌效果會受到影響。