曼氏裂頭蚴IgG抗體（SM-IgG）人elisa

樣品收集,、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1.  酶標儀（450nm）

2.  高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.  37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶充分溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。

3.  預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達到試劑盒的的最佳檢測效果。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次,。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min,，洗板5次,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置陰,、陽性對照孔和樣本孔，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照各50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL,；

4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；

               陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性

試劑盒性能

1. 準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結(jié)果有效,。

2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。

4. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。

5. 有效期：6個月

免責(zé)聲明

1.  試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān),，本公司概不負責(zé),。

 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔(dān),。

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