活細(xì)胞鑒定試劑盒提供了一種基于熒光強(qiáng)度來(lái)檢測(cè)細(xì)胞中染色質(zhì)改變的便捷方法。 本試劑盒提供了兩種即用型的核酸染料:Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidine Iodide,PI),。Hoechst 33342是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst33342染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè),。Hoechst33342也常用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色,。Hoechst33342的zui大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結(jié)合后,,zui大激發(fā)波長(zhǎng)為350nm,,zui大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。 碘化丙啶(Propidine Iodide,PI),,是一種核酸染料,,它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜,但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,,PI夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅,。當(dāng)結(jié)合DNA后,,zui大激發(fā)波長(zhǎng)535nm和zui大發(fā)射波長(zhǎng)約為617 nm。 Hoechst 33342與DNA結(jié)合后,,凋亡細(xì)胞中的凝聚染色質(zhì)會(huì)比正常細(xì)胞中的染色質(zhì)染色更深,、更加明亮,。PI只能滲透進(jìn)入死亡細(xì)胞,兩種染料同時(shí)使用,通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)或者流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以區(qū)分出正常細(xì)胞,,凋亡細(xì)胞和死亡細(xì)胞,。 正常細(xì)胞為低藍(lán)色/低紅色(Hoechst33342+/PI+),,凋亡細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色(Hoechst33342++/PI+),壞死細(xì)胞為低藍(lán)色/高紅色(Hoechst33342+/PI++),。 應(yīng)用 用于排除死細(xì)胞和有核活細(xì)胞計(jì)數(shù) |