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選對(duì)轉(zhuǎn)印膜，Western離成功又進(jìn)一步

閱讀：480 發(fā)布時(shí)間：2016-3-4

為了獲得一個(gè)漂亮的western blot結(jié)果,，大家也是蠻拼的。一抗,、二抗,、封閉、顯色,，各種優(yōu)化,。轉(zhuǎn)印膜，大家好像不太在意,。一般都是實(shí)驗(yàn)室里有什么,，我就用什么。NC,、PVDF,，,。殊不知，這小小的一塊膜也與zui終的結(jié)果息息相關(guān),。如何選擇zui合適的轉(zhuǎn)印膜,，小編來給你支兩招。

NC膜vs. PVDF膜

硝酸纖維素（NC）膜和聚偏二氟乙烯（PVDF）膜是westernblot中zui常用的兩種膜,。NC膜是zui早用于westernblot的膜,，它的優(yōu)點(diǎn)在于容易被乙醇溶液潤濕，同時(shí)產(chǎn)生不錯(cuò)的結(jié)果,。PVDF膜在1985年被開發(fā)出來,，在嚴(yán)苛條件下表現(xiàn)出更高的蛋白保留，比如有機(jī)溶劑存在時(shí),，或者在酸性或堿性條件下,。

與NC膜相比，PVDF膜有著更高的機(jī)械強(qiáng)度和出色的化學(xué)穩(wěn)定性,，因此適合多次剝離（stripping）和反復(fù)檢測（reprobing）,。同時(shí)，PVDF膜也有著更高的結(jié)合能力,。NC膜的典型結(jié)合能力是80μg/cm2,，而PVDF膜達(dá)到150-160μg/cm2，這意味它的靈敏度更高,。由于PVDF膜的疏水性,，它成為疏水蛋白質(zhì)（如膜蛋白）的。也正因?yàn)槿绱耍?/span>PVDF膜在使用前需要一個(gè)簡短的甲醇潤濕步驟,。

PVDF膜也有講究

看到這里,，也許你準(zhǔn)備打訂購PVDF膜了吧，別急,，這里面的學(xué)問還不少。同樣是PVDF膜,，它們的性質(zhì)也有不同,。以Pall生命科學(xué)的FluoroTrans家族為例，盡管這些PVDF膜都具有高的蛋白結(jié)合能力,，但它們有著不同的側(cè)重點(diǎn),。

FluoroTrans PVDF膜是為N端蛋白測序而優(yōu)化的，具有高的吸附能力,，高的蛋白保留能力以及對(duì)于化學(xué)溶劑的抗性,。它的孔徑約為0.2 µm。固定在FluoroTrans膜上的蛋白不容易被去除,，即使是用強(qiáng)烈的離液鹽,。此外，它的熒光背景極低，適合熒光免疫檢測,。

若是開展westernblot,，FluoroTrans W PVDF膜則是*。它有著*的靈敏度,、出色的分辨率,，在所有檢測系統(tǒng)中都表現(xiàn)出非常低的背景水平。此外,，它用結(jié)合能力和保留能力上的一點(diǎn)點(diǎn)犧牲,，換取了轉(zhuǎn)移過程中極低的蛋白穿透。這種膜的通用性也很好,，對(duì)10 kD的小蛋白和>100 kD的大蛋白都適用,。因此,，你不需要在實(shí)驗(yàn)室里準(zhǔn)備0.2 µm和0.45 µm兩種孔徑的膜,，只要這一種0.2 µm的膜就夠了。

各種包裝

轉(zhuǎn)印膜通常以各種包裝形式提供,，比如FluoroTrans W PVDF膜,，Pall就提供了一大卷的膜和各種預(yù)切膜。相比之下,，一大卷（26 cm x 3.3 m）當(dāng)然更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠,，用多少切多少，不過要麻煩一點(diǎn),。各種大小的預(yù)切膜（7 x 9 cm,、10 x 15 cm或20 x 20 cm）則省時(shí)省力，只是不太省錢,。

使用小貼士

BSA通常作為NC膜的封閉液,，但是對(duì)于PVDF膜，它的封閉效果并不好,。因此,，Pall建議，在封閉PVDF膜時(shí)選用0.5%的酪蛋白（Casein）,。具體操作如下：將酪蛋白加入緩沖液中，然后在加熱板上加熱至80℃或直到溶解,；不要煮沸溶液,。在使用前冷卻至25-40℃。