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選對(duì)轉(zhuǎn)印膜,，Western離成功又進(jìn)一步
閱讀：512 發(fā)布時(shí)間：2016-3-4為了獲得一個(gè)漂亮的western blot結(jié)果，大家也是蠻拼的,。一抗,、二抗、封閉,、顯色,，各種優(yōu)化。轉(zhuǎn)印膜,，大家好像不太在意,。一般都是實(shí)驗(yàn)室里有什么，我就用什么,。NC,、PVDF，,。殊不知,，這小小的一塊膜也與zui終的結(jié)果息息相關(guān)。如何選擇zui合適的轉(zhuǎn)印膜,，小編來(lái)給你支兩招,。
NC膜vs. PVDF膜
硝酸纖維素（NC）膜和聚偏二氟乙烯（PVDF）膜是westernblot中zui常用的兩種膜。NC膜是zui早用于westernblot的膜,，它的優(yōu)點(diǎn)在于容易被乙醇溶液潤(rùn)濕,，同時(shí)產(chǎn)生不錯(cuò)的結(jié)果。PVDF膜在1985年被開發(fā)出來(lái),，在嚴(yán)苛條件下表現(xiàn)出更高的蛋白保留,，比如有機(jī)溶劑存在時(shí)，或者在酸性或堿性條件下,。
與NC膜相比,，PVDF膜有著更高的機(jī)械強(qiáng)度和出色的化學(xué)穩(wěn)定性，因此適合多次剝離（stripping）和反復(fù)檢測(cè)（reprobing）,。同時(shí),，PVDF膜也有著更高的結(jié)合能力,。NC膜的典型結(jié)合能力是80μg/cm2，而PVDF膜達(dá)到150-160μg/cm2,，這意味它的靈敏度更高,。由于PVDF膜的疏水性，它成為疏水蛋白質(zhì)（如膜蛋白）的,。也正因?yàn)槿绱耍?/span>PVDF膜在使用前需要一個(gè)簡(jiǎn)短的甲醇潤(rùn)濕步驟,。
PVDF膜也有講究
看到這里，也許你準(zhǔn)備打訂購(gòu)PVDF膜了吧,，別急,，這里面的學(xué)問(wèn)還不少。同樣是PVDF膜,，它們的性質(zhì)也有不同,。以Pall生命科學(xué)的FluoroTrans家族為例，盡管這些PVDF膜都具有高的蛋白結(jié)合能力,，但它們有著不同的側(cè)重點(diǎn),。
FluoroTrans PVDF膜是為N端蛋白測(cè)序而優(yōu)化的，具有高的吸附能力,，高的蛋白保留能力以及對(duì)于化學(xué)溶劑的抗性,。它的孔徑約為0.2 µm。固定在FluoroTrans膜上的蛋白不容易被去除,，即使是用強(qiáng)烈的離液鹽,。此外，它的熒光背景極低,，適合熒光免疫檢測(cè),。
若是開展westernblot，FluoroTrans W PVDF膜則是*,。它有著*的靈敏度,、出色的分辨率，在所有檢測(cè)系統(tǒng)中都表現(xiàn)出非常低的背景水平,。此外,，它用結(jié)合能力和保留能力上的一點(diǎn)點(diǎn)犧牲，換取了轉(zhuǎn)移過(guò)程中極低的蛋白穿透,。這種膜的通用性也很好,，對(duì)10 kD的小蛋白和>100 kD的大蛋白都適用。因此,，你不需要在實(shí)驗(yàn)室里準(zhǔn)備0.2 µm和0.45 µm兩種孔徑的膜,，只要這一種0.2 µm的膜就夠了。
各種包裝
轉(zhuǎn)印膜通常以各種包裝形式提供,，比如FluoroTrans W PVDF膜,，Pall就提供了一大卷的膜和各種預(yù)切膜,。相比之下，一大卷（26 cm x 3.3 m）當(dāng)然更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠,，用多少切多少,，不過(guò)要麻煩一點(diǎn)。各種大小的預(yù)切膜（7 x 9 cm,、10 x 15 cm或20 x 20 cm）則省時(shí)省力,，只是不太省錢。
使用小貼士
BSA通常作為NC膜的封閉液,，但是對(duì)于PVDF膜，它的封閉效果并不好,。因此,，Pall建議，在封閉PVDF膜時(shí)選用0.5%的酪蛋白（Casein）,。具體操作如下：將酪蛋白加入緩沖液中,，然后在加熱板上加熱至80℃或直到溶解；不要煮沸溶液,。在使用前冷卻至25-40℃,。
另外，不要讓膜在檢測(cè)過(guò)程中的任何時(shí)間點(diǎn)干透,，如果膜部分變干,，可以讓膜*干掉，然后用甲醇重新潤(rùn)濕,，之后用緩沖液浸泡,，繼續(xù)操作。如果你對(duì)PVDF膜或westernblot過(guò)程還有其他問(wèn)題,，我們,。
Western，我們有整體解決方案：
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