化工儀器網(wǎng)
公司動態(tài)
2015版中國藥典微生物項變化的應(yīng)對策略—培養(yǎng)基
閱讀：626 發(fā)布時間：2015-5-21培養(yǎng)基對于做微生物的來說就好比是天文學(xué)家觀察宇宙天體的哈勃望遠(yuǎn)鏡一樣，通過哈勃望遠(yuǎn)鏡你可以看到黑洞的盤狀構(gòu)造,，也可能發(fā)現(xiàn)太陽系外的其他行星,，就像我們的培養(yǎng)基，讓我們?nèi)祟惸馨l(fā)現(xiàn)那些小小的菌種并觀察它們的形態(tài)，所以培養(yǎng)基的質(zhì)量幾乎成就了我們實驗成功的一半,，它對于我們微生物檢驗的意義絕不容小覷,！
1、培養(yǎng)基配方梳理
根據(jù)自己企業(yè)需使用的培養(yǎng)基整理其配方,，zui終篩選出的培養(yǎng)基必須與2015版藥典規(guī)定的培養(yǎng)基配方一致,，值得一提的是如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中的葡萄糖，在中國藥典寫5.0g,，如果后續(xù)篩選國外品牌的培養(yǎng)基,，其配方上的葡萄糖可能寫5.5g，USP上硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基上的葡萄糖寫的是5.0g/5.5g,，如果一眼看去,，可能會直接剔除該國外品牌的培養(yǎng)基，其實并非,，中國藥典寫的5.0g的葡萄糖是指無水葡萄糖,，國外品牌配方中的5.5g是指一水葡萄糖，其實是可以使用的,。
所以對于配方的梳理相當(dāng)重要,，讓我們在*步的時候不至于走錯，否則如果配方不對僅核對名稱,，那zui后買單的可能真的是實驗室自己了,。很多人喜歡拿著藥典直接核對，自己梳理的好處是印象會更加深刻,，所有培養(yǎng)基均整理成一個表格,，便于以后查找和管理。當(dāng)然每個物料對于微生物生長的作用,，我覺得有興趣的同學(xué)可以了解一下,，這對這次藥典為什么培養(yǎng)基會變化會有更深入的理解。以下舉例TSB
2,、培養(yǎng)基供應(yīng)商的篩選
這里指的培養(yǎng)基包括培養(yǎng)基干粉及成品培養(yǎng)基,，干粉指的是按藥典配方生產(chǎn)的培養(yǎng)基干粉，直接溶解滅菌即可使用,，成品培養(yǎng)基是指用按藥典配方生產(chǎn)的培養(yǎng)基干粉制備出的預(yù)灌裝的平皿及液體培養(yǎng)基,，即配制好的培養(yǎng)基可直接使用。
對于品牌的篩選每個實驗室仁者見仁智者見智,，都有一套自己的評判標(biāo)準(zhǔn),，如成本或到貨周期的考量，但是適用性檢查的標(biāo)準(zhǔn)只有一套,，那就是藥典明確規(guī)定的培養(yǎng)基的適用性檢查方法,。之前有個國內(nèi)大型企業(yè)的實驗室主管問我們使用哪家的干粉,，她說她們實驗室一共就7種培養(yǎng)基，但是涉及到的廠家卻有三家,，比如培養(yǎng)基1號,、2號、3號使用廠家A的,，培養(yǎng)基4號,、5號是廠家B的，培養(yǎng)基6號,、7號是廠家C的,，這樣一來就真的不好管理，因為你有那么多廠家并不是我們所謂的備選供應(yīng)商的概念,，他是指培養(yǎng)基1號就一個供應(yīng)商就是廠家A如果A斷貨或質(zhì)量有問題就不能選用廠家B或C的,；還有一個她現(xiàn)在面臨的棘手問題是，廠家A培養(yǎng)基干粉瓶上的建議滅菌溫度是115℃,、20min,，廠家B培養(yǎng)基干粉瓶上的建議滅菌溫度是121℃、15min,，這樣如果配制這2個不同廠家的培養(yǎng)基還不能同一批一起滅菌,，因為滅菌溫度時間都不一樣，那講到這里大家又會發(fā)現(xiàn)一個問題,，那就是如果滅菌溫度時間不一樣,，那使用的滅菌器驗證時候的滅菌條件又會增加一個，包括空載/滿載熱分布,、滿載熱穿透生物指示劑挑戰(zhàn)那一大堆的事,。。,。,。。,。聽完以后我真的是為她著急?。嶒炇屹Y源就在此時被白白浪費(fèi),，不說水電吧,，一支生物指示劑那就要小一百了，還是三次滿載挑戰(zhàn),！統(tǒng)一的培養(yǎng)基供應(yīng)商統(tǒng)一的滅菌條件是zui便于管理的,，相信現(xiàn)在這樣的企業(yè)應(yīng)該越來越少了,，那正好趁這次15版改版的契機(jī),，好好篩選一下我們的培養(yǎng)基供應(yīng)商！
挑選國內(nèi)或國外大型的培養(yǎng)基干粉生產(chǎn)廠家，這樣的廠家的資質(zhì)審計相對會比較方便資料也齊全,，另外我建議至少篩選出2家廠家,，這2家廠家的產(chǎn)品是包含了實驗室需要的所有培養(yǎng)基干粉品種，其中1家是廠家,，另1家是備選,。選擇過程中務(wù)必結(jié)合后續(xù)希望使用的成品培養(yǎng)基的情況，因為大家知道現(xiàn)在成品培養(yǎng)基有的是干粉培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家直接生產(chǎn)的,，也有的是僅進(jìn)行成品培養(yǎng)基預(yù)灌裝的廠家,，我個人的理念是，干粉選擇什么廠家,，對應(yīng)的成品培養(yǎng)基的干粉原料也是這個廠家,，這樣能夠zui大限度的保證實驗數(shù)據(jù)的穩(wěn)定。
培養(yǎng)基比較有名的廠家做微生物的基本都耳熟能詳,，找供應(yīng)商上門先了解一下大概的情況,，同時和供應(yīng)商交流一下后續(xù)審計的內(nèi)容，因為篩選合格的培養(yǎng)基供應(yīng)商還是需要實驗數(shù)據(jù)說話的,，供應(yīng)商吹的多天花亂墜也沒有實驗數(shù)據(jù)來的有說服力,！
3、培養(yǎng)基供應(yīng)商的審計
1）資質(zhì)審計
資質(zhì)審計審什么,？我們QC比較關(guān)心的內(nèi)容基本包含以下一些內(nèi)容,，生產(chǎn)證書、生產(chǎn)工藝,、配方,、出廠標(biāo)準(zhǔn)、CoA,、效期證明,、價格、到貨周期,、外包裝耐過氧化氫或其他滅菌劑滅菌證明（一般指在隔離器內(nèi)經(jīng)其滅菌劑外表面滅菌后使用的成品培養(yǎng)基）,、輻照廠家輻照劑量、如國外供應(yīng)商則應(yīng)有進(jìn)口批文還有國內(nèi)授權(quán)代理書等,，可參照各企業(yè)QA的供應(yīng)商審計中的資質(zhì)審計進(jìn)行,。理論上，在資質(zhì)審計完成后,，才能進(jìn)行適用性審計,，但是如果對這家供應(yīng)商非常有信心，兩方面的審計也可以同步進(jìn)行,。
2）適用性審計
適用性審計基本上就是對培養(yǎng)基進(jìn)行藥典規(guī)定的適用性檢查實驗,，但是對于商品化的東西我們還是需要加入一些其他的檢查項目,，我們實驗室的檢查項目分四個：外觀檢查、pH檢查,、無菌性檢查,、靈敏度檢查。
干粉我們這里是選取每個品種的其中一批進(jìn)行檢查,，因為原本就計劃干粉和成品培養(yǎng)基的干粉原料是一個品牌,，成品培養(yǎng)基的每個品種我們均進(jìn)行三批次的檢查，且每批次均包含試驗及末次試驗,，試驗即收到樣品后直接進(jìn)行適用性檢查,，合格后按要求貯存到規(guī)定效期時再進(jìn)行末次試驗，試驗和末次試驗的檢查項目是*一致的,，確認(rèn)其在規(guī)定貯存條件的有效期內(nèi)適用性檢查仍符合實驗要求,，也有的企業(yè)是在效期過后一周內(nèi)進(jìn)行，那更加具有挑戰(zhàn)性,，其實這個看不同企業(yè)需求,，雖然有的成品培養(yǎng)基是6個月，但是實際使用當(dāng)中不會使用到那么長時間,，那在近效期的時候進(jìn)行末次試驗無可厚非,，但是基本上廠家效期驗證肯定是做到效期之后的就如同我們藥品一樣，所以在效期過后的一周內(nèi)進(jìn)行末次試驗對于該培養(yǎng)基的考察更有意義,，當(dāng)然若末次試驗不合格可能面臨與供應(yīng)商溝通的問題,，大部分供應(yīng)商是認(rèn)賬的，但也不排除一些比較計較的說你們是在效期過后試驗,，所以試驗結(jié)果我們不認(rèn),。
適用性審計中的各個檢查項目，在這里我也大致的說一下,，外觀檢查項和pH檢查項是我們自己加入的檢查,，外觀檢查項的話比如外包裝是否完整、培養(yǎng)基的顏色是否正常等,，pH檢查項在干粉配制成液體培養(yǎng)基或者是成品培養(yǎng)基的確認(rèn)時就很有幫助,，比如我們就遇到過成品培養(yǎng)基剛來是合格的，但是貯存到近效期其pH就跌出下限了（特別注意SDA）,。在這兩個基礎(chǔ)檢查項均合格后,，才進(jìn)行后續(xù)無菌性檢查和靈敏度檢查，這兩項就是*按照藥典規(guī)定來進(jìn)行的,，特別提醒的是回收率的對照品應(yīng)使用中檢所對照培養(yǎng)基,。四項檢查均合格則判其適用性審計合格。
以下是我們實驗進(jìn)行培養(yǎng)基干粉及成品培養(yǎng)基的部分列表,，因涉及到供應(yīng)商所以把其名稱,、貨號,、批號和價格隱去。
在上表中可以發(fā)現(xiàn)有些公司的成品培養(yǎng)基還是有這樣那樣的問題,，當(dāng)然廠家也解釋說因為其產(chǎn)品為輻照產(chǎn)品，我們使用的是中檢所的對照培養(yǎng)基未經(jīng)輻照,，所以回收率會不合格,，但是zui終我們還是要符合中國藥典的標(biāo)準(zhǔn)的，所以我們沒有讓步,。還要就是若實驗做出來結(jié)果不符合要求應(yīng)先確認(rèn)實驗室的實驗結(jié)果,，我們這里確認(rèn)不合格的實驗次數(shù)起碼是三次，確認(rèn)結(jié)果后再和供應(yīng)商進(jìn)行溝通,，后續(xù)應(yīng)進(jìn)行供應(yīng)商實驗室和我們實驗室的對比實驗,，zui終確定產(chǎn)品是否有問題。
4,、培養(yǎng)基的包裝
這個單獨(dú)列一條進(jìn)行討論是針對自配及商購的成品培養(yǎng)基而言,，其包裝對于日常使用、貯存有著很大的意義,，不知道大家在用別的廠家買來的預(yù)灌裝的培養(yǎng)基有沒有細(xì)心觀察過其包裝,，以下我就預(yù)制平皿及液體培養(yǎng)基大致分析一下現(xiàn)狀。
1）預(yù)制平皿
預(yù)制平皿的商購包裝我看到過三種,，基本都是三層包裝,，一種是平皿放置的習(xí)慣為5+5就是橫著放，袋子手感比較薄的,，但是優(yōu)勢是該袋子可降解,，且因為有一定透氣性，平皿內(nèi)部不易產(chǎn)生水滴,。第二種是zui里面2層是呼吸袋,，zui外面一層是聚乙烯材質(zhì)的塑料袋。第三種是zui里面一層是聚乙烯材質(zhì),，外面2層是呼吸袋,，后面2種均是豎直放置10塊平皿現(xiàn)在用的比較多。
不管材質(zhì)如何,，一方面我們要考慮平皿外包裝對于內(nèi)置平皿的貯存無菌保證,、水分的流失以及使用時候拆包的方便性，另一個很重要的是對于今后放置于隔離器內(nèi)經(jīng)外表面滅菌后,，該包裝對隔離器滅菌劑的穿透性,，這個的話首先需要廠家提供的驗證證明，如防過氧化氫穿透的驗證證明,，同時在后續(xù)討論的隔離器的驗證中也要進(jìn)行檢測,，畢竟每個企業(yè)的隔離器內(nèi)滅菌的濃度和時間均不同,。
若自配預(yù)制平皿，有很多公司還是臨用現(xiàn)配的,，基本其有效期為7天（按藥典要求）,，但我這人比較懶，希望能多用一段時間,，也便于管理,，所以進(jìn)行了100天的貯存效期的驗證，制備好預(yù)制平皿進(jìn)行預(yù)培養(yǎng),，預(yù)培養(yǎng)后進(jìn)行平皿挑選,，合格的平皿用兩層袋包裝后貯存使用，效期三個月,，用下來還是比較不錯的,。
當(dāng)然自配和商購的各有利弊，自配的回收率可能高于商購的（基于同一品牌干粉而言）,，因為商購需要進(jìn)行終端滅菌,，終端滅菌方法對某些菌的回收率會有一定影響，而且一批輻照批次的產(chǎn)品,，可能放在各個位置的均勻度不夠好,，會導(dǎo)致一條10塊的平皿中，5塊是好的另5塊不太好,，以上問題在國外購買的成品培養(yǎng)基上沒有發(fā)現(xiàn),，但是國內(nèi)生產(chǎn)成品培養(yǎng)基的某些廠家確實會有上述問題，所以輻照效果的考察在國內(nèi)生產(chǎn)成品培養(yǎng)基的供應(yīng)商審計的時候必須更加注意,！但是商購的每塊平皿的灌裝量和追溯性比較好（每塊有噴碼批號有效期）,，包裝的密封性更好。
2）液體培養(yǎng)基
對于液體培養(yǎng)基,，現(xiàn)在很多實驗室用鋁蓋膠塞對輸液瓶進(jìn)行密封軋蓋,，該類密封性的包裝可以延長液體培養(yǎng)基的貯存時間，但是對于實驗室自己使用自動軋蓋封口機(jī)進(jìn)行軋蓋及滅菌的實驗室而言有兩點(diǎn)隱患,。
*,，滅菌安全性問題。
滅菌時溫度升高里面的水部分變?yōu)樗魵?，但因為密封包裝,，所以瓶內(nèi)壓較大，在滅菌時有爆瓶幾率,，而且在滅菌后,，因為培養(yǎng)基不能一直放置在滅菌器內(nèi)，內(nèi)部溫度高會導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色加深，培養(yǎng)基內(nèi)的成分可能有一定破壞,，故一滅菌完成,，壓力表歸零，滅菌器腔體達(dá)到開門溫度要求后,，立即將培養(yǎng)基瓶取出,，但是這個時候，瓶內(nèi)培養(yǎng)基的溫度還是相當(dāng)高的,，在取出的時候勢必對培養(yǎng)基瓶有一定的晃動,，之前的爆瓶率在這個時候還是存在的，這個也是因為我們有實際的案例,，所以大家一定注意使用安全,！
第二,，包裝可能引入污染問題,。
滅菌的溫度一般為121℃、15min,，但是軋蓋使用的鋁蓋和膠塞以及軋蓋的環(huán)境可能會導(dǎo)致鋁蓋及膠塞間有部分微生物在該滅菌溫度時間無法全部殺滅,，有導(dǎo)致污染的可能，實際操作過程中也發(fā)現(xiàn)實驗室使用的所謂的自動封口機(jī)對于輸液瓶的封口并不那么嚴(yán)密?，F(xiàn)實環(huán)境是一般實驗室會使用國產(chǎn)的鋁蓋,、膠塞和輸液瓶，若本身該企業(yè)的產(chǎn)品為輸液瓶,，則實驗室可以借用生產(chǎn)的條件對實驗室培養(yǎng)基進(jìn)行包裝,，那這就。但是多數(shù)情況下,，實驗室還是需要單獨(dú)制備,，因為實驗室鋁蓋、膠塞和輸液瓶使用的量較小,，所以很多產(chǎn)品好的廠家是不會銷售這些產(chǎn)品給QC的,，所以現(xiàn)實情況下QC使用的鋁蓋膠塞和瓶確實不理想。
那很多人會問,，那我后續(xù)做無菌檢查要使用隔離器,，我也不可能使用非密封包裝形式的培養(yǎng)基呀，這樣我只能使用商購的成品培養(yǎng)基了嗎,？那太貴了,！老板也不同意啊,！好既然這樣我就把我們企業(yè)自己發(fā)明的包裝形式貢獻(xiàn)給各位微生物檢驗的同胞,，篩選瓶子用挺多時間，終于篩選出一個相對比較滿意的輸液瓶了,，輸液瓶是玻璃的,，瓶口是旋轉(zhuǎn)的,，瓶蓋的頂部是膠塞，便于無菌檢查的扎針,，滅菌前將該瓶口擰緊后回旋半圈（滅菌時保持內(nèi)外壓,，減少安全問題），然后瓶身外套一層呼吸袋封口,，滅菌后隔著呼吸袋回擰半圈擰緊瓶蓋,，至于回旋的位置因為隔著呼吸袋去旋轉(zhuǎn)很難掌握是否擰緊的位置，所以我也想了個辦法,，滅菌前瓶口擰緊時,，在瓶蓋和瓶身上豎直貼上滅菌指示帶，然后用剪刀橫向剪斷瓶蓋和瓶身的條帶,，然后回旋半圈,，待滅菌完畢后，回擰至瓶蓋和瓶身的滅菌指示帶呈一直線即擰緊,，見下圖,。
當(dāng)然這個包裝必須能經(jīng)受隔離器內(nèi)滅菌劑滅菌的考驗，我們進(jìn)入潔凈室就脫去外部呼吸袋的包裝,，然后進(jìn)入隔離器就是瓶子,，至少經(jīng)我們實驗室隔離器的驗證，能防止過氧化氫的穿透,，同時用該包裝貯存硫乙醇也可以保證三個月的效期（大家可以挑戰(zhàn)更長時間的效期,，因為硫乙醇氧化層和厭氧層的比例在該包裝里確實保持的不錯）。日常管理的話每次配制只需換瓶蓋的膠塞即可,，當(dāng)然了瓶子和瓶蓋我買的是國外的,，膠塞我就買國產(chǎn)的了，成本一定要考慮,，該用好的用好的,，該省的就要省。當(dāng)初篩選的壓力和工作量還是很大的,，希望還在摸索中的實驗室不再和我們一樣走彎路,，這次就把這個包裝貢獻(xiàn)出來，希望對大家有幫助,，也希望我們中國藥企的微生物實驗室能夠在這種細(xì)節(jié)上多交流,，共同進(jìn)步！同時也感謝一些商購培養(yǎng)基和中檢所實驗室的培養(yǎng)基包裝對我們的啟發(fā),。
說了那么多,，zui后說一下商購液體培養(yǎng)基，這個我真的是要贊國外的培養(yǎng)基，確實非常不錯,，當(dāng)然我現(xiàn)在也非常希望國內(nèi)的液體培養(yǎng)基能夠加把勁,，因為國內(nèi)的優(yōu)勢真的是供貨時間和價格，這對于企業(yè)還是具有相當(dāng)誘惑力的,，我們也不希望都被國外所壟斷,，但是質(zhì)量真的是zui高的一個門檻。對于企業(yè)來說,，購買商購液體培養(yǎng)基在這次15版藥典升級后是個使用趨勢,，其包裝zui重要的無外乎就是無菌性、靈敏度,、包裝耐隔離器滅菌等,。這點(diǎn)國外的液體成品培養(yǎng)基各類包裝形式及基本資料都非常齊全，實驗室可以根據(jù)自己的需要選擇相應(yīng)的包裝形式,，供應(yīng)商肯定在商品介紹時就會一并幫助挑選,，之后符合審計要求就可以納入合格供應(yīng)商的目錄使用。
5,、對照培養(yǎng)基
對于中國藥典在2010版引入對照培養(yǎng)基的概念,，我個人是相當(dāng)贊成的,，就像理化試驗使用的標(biāo)準(zhǔn)品一樣,，中國很多企業(yè)使用的培養(yǎng)基干粉質(zhì)量參差不齊，導(dǎo)致zui終實驗結(jié)果的誤判,，這樣的損失真的是企業(yè)所無法承擔(dān)的,。
中檢所這次對于新引入的培養(yǎng)基對應(yīng)對照培養(yǎng)基是相當(dāng)重視的，現(xiàn)在還在進(jìn)行對照培養(yǎng)基的篩選工作,，如果大家實時跟進(jìn)中檢所的的話,，可以發(fā)現(xiàn)TSA這個培養(yǎng)基的對照培養(yǎng)基已進(jìn)行更換，其原來的克數(shù)是12g/300ml,，現(xiàn)在是11.1g/300ml,，當(dāng)然要進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性審計，我們還是需要某些培養(yǎng)基的對照培養(yǎng)基的,，所以實驗室必須盡早做出審計計劃購買對照培養(yǎng)基,，一般是通過省所去中檢所進(jìn)行購買，我們一起希望在2015版生效之前,，對照培養(yǎng)基能夠齊全吧,！
6、培養(yǎng)基的管理趨勢
借鑒外企微生物實驗室的管理模式,，微限,、無菌、環(huán)境檢測的培養(yǎng)基均商購，然后進(jìn)廠檢驗放行后使用,，在產(chǎn)品檢驗完成后,，再次進(jìn)行結(jié)束檢驗，確認(rèn)在使用過程中,，該批培養(yǎng)基均符合使用要求,。
現(xiàn)在實驗室的培養(yǎng)基管理已經(jīng)慢慢傾向于系統(tǒng)化的管理，很多外企使用商品化的培養(yǎng)基,、商品化的定量菌株等,，這樣將人員的專注力集中于實驗本身，其實這也是種風(fēng)險共擔(dān)的管理模式,，讓專業(yè)的人去做他專業(yè)的事情,，在前端對商購的培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的供應(yīng)商審計，這樣也省卻了實驗室若出現(xiàn)OOS結(jié)果對自配培養(yǎng)基從配制到滅菌到貯存等在實驗室發(fā)生的一系列的調(diào)查,，商購培養(yǎng)基可能只需對貯存,、使用等進(jìn)行調(diào)查即可。
從成本上考慮,，我相信國內(nèi)的成品培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)也會跟上腳步,，這樣對于國內(nèi)藥企來說，實驗室自配和商購成品培養(yǎng)基的成本其實相差并不大,，企業(yè)自身的人員管理壓力和成本壓力也會相應(yīng)減小,。
所以回到之前的話題，培養(yǎng)基的篩選和供應(yīng)商審計就顯得格外重要,，我們要把困難的事情往前做,，這樣我們就會有更多的精力去解決我們更重要的技術(shù)問題。培養(yǎng)基的管理是不斷進(jìn)步的過程,，我們實驗室碰了不少壁,，但是收獲更多，相信大家肯定會有更多更好的建議,，也期待大家的交流和意見,！