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細胞鋪板：如何鋪的均勻
閱讀：4784 發(fā)布時間：2015-5-27做細胞生物學實驗，細胞鋪板大概是zui常見的一個實驗了,。但是有很多人不是很得要領(lǐng),，鋪得不是均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂?，F(xiàn)分享我的實驗技巧,。
一般 96 孔板我每孔是加 100 微升細胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入,。加完半邊板后,，將未加的細胞懸液混一下，再繼續(xù)加剩余的半邊板子,。都加完后蓋上蓋子,，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣,。
注意把握力度（我一般輕巧敲三下）,，太強或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉(zhuǎn)（逆時針效果不好）,，依次敲擊剩余三個邊,，靜置約 5 分鐘，放入 37 度培養(yǎng)箱,。
6 孔板,、12 孔板或 24孔板，我均采用將*個孔加入少量無血清培養(yǎng)基,，晃動浸潤整個孔底,。然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底。其它孔一次類推,，這樣整個孔底都是濕潤的,，細胞懸液會平鋪在整個孔底。
加細胞懸液的時候可以避免加在中間中間細胞多,，而加在周邊晃勻后周邊細胞多中間少的現(xiàn)象,，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下,。
這個方法就是有點慢,，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,，但力度沒有 96 孔板好掌握,，效果沒有 96 孔板好，所以我放棄改用浸潤孔底的方法,。
細胞懸液加完后,，將細胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光,，從底部往上看,，看細胞有沒有抱團。然后從底部敲擊,，使之分散,。
如果實驗室有平板振蕩器的話，我建議用這個儀器稍振蕩一下,，效果不錯,，就是振幅小，頻率高的那種,。
細胞要盡量打散,，大部分呈單個狀態(tài)。離心后,，要充分懸?。∵€有轉(zhuǎn)移到六孔板后,，是要晃得,。晃的時候不要讓那個細胞液轉(zhuǎn)圈,，不然細胞就全被帶到中間去了,，就會不均勻。
一瓶細胞長滿后,，正常處理,，在培養(yǎng)瓶里吹勻,。然后鋪 6 孔板，每孔 2 毫升,，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,。然后放到培養(yǎng)箱里，輕微的左三圈,、右三圈,、前三圈、后三圈,?；旧?span style="font-family:helvetica,sans-serif"> 24 小時之后觀察每孔的細胞都會很均勻。
計算好所需要的全部液體量和細胞量,，混勻后,，加到六孔板里，六孔板按橫 8 字型晃,。顯微鏡下觀察,，如果不均勻，按上述方法再晃,。如果細胞未計數(shù)直接種的話，在種六孔板的過程中,，隨時晃一下混勻用的瓶子,，瓶子我通常是順時針或逆時針轉(zhuǎn)圈。
放在水平板面上先上下移動,，再左右移動,，每個方向５到６次，但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中,，不要再做過多的運動,，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了,。