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細(xì)胞鋪板：如何鋪的均勻
閱讀：4846 發(fā)布時(shí)間：2015-5-27做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪板大概是zui常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了,。但是有很多人不是很得要領(lǐng),，鋪得不是均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂?，F(xiàn)分享我的實(shí)驗(yàn)技巧,。
一般 96 孔板我每孔是加 100 微升細(xì)胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入,。加完半邊板后,，將未加的細(xì)胞懸液混一下，再繼續(xù)加剩余的半邊板子,。都加完后蓋上蓋子,，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣,。
注意把握力度（我一般輕巧敲三下）,，太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好）,，依次敲擊剩余三個(gè)邊,，靜置約 5 分鐘，放入 37 度培養(yǎng)箱,。
6 孔板,、12 孔板或 24孔板，我均采用將*個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基,，晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底,。然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底,。其它孔一次類推,，這樣整個(gè)孔底都是濕潤的，細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,。
加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,，而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,，細(xì)胞分散較均勻，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下,。
這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,，但力度沒有 96 孔板好掌握,，效果沒有 96 孔板好，所以我放棄改用浸潤孔底的方法,。
細(xì)胞懸液加完后,，將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高，對(duì)著燈光,，從底部往上看,，看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,，使之分散,。
如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話，我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,，效果不錯(cuò),，就是振幅小，頻率高的那種,。
細(xì)胞要盡量打散,，大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,，要充分懸?。∵€有轉(zhuǎn)移到六孔板后,，是要晃得,。晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,，不然細(xì)胞就全被帶到中間去了，就會(huì)不均勻,。
一瓶細(xì)胞長滿后,，正常處理，在培養(yǎng)瓶里吹勻,。然后鋪 6 孔板,，每孔 2 毫升，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,。然后放到培養(yǎng)箱里,，輕微的左三圈,、右三圈、前三圈,、后三圈,。基本上 24 小時(shí)之后觀察每孔的細(xì)胞都會(huì)很均勻,。
計(jì)算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,，混勻后，加到六孔板里,，六孔板按橫 8 字型晃,。顯微鏡下觀察，如果不均勻,，按上述方法再晃,。如果細(xì)胞未計(jì)數(shù)直接種的話，在種六孔板的過程中,，隨時(shí)晃一下混勻用的瓶子,，瓶子我通常是順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)圈。
放在水平板面上先上下移動(dòng),，再左右移動(dòng),，每個(gè)方向５到６次，但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中,，不要再做過多的運(yùn)動(dòng),，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了,。