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生物分子類實驗室常用實驗技術原理匯總-4
閱讀：547 發(fā)布時間：2014-12-8九、RT-PCR
RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術,。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,，再以cDNA為模板,，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行,。在兩步法RT-PCR中,，每一步都在*條件下進行。
實驗步驟：
1,、RNA的提?。?/span>
2,、反轉錄合成cDNA,；
3、PCR擴增,；
4,、產物的電泳和結果的測定。
十,、實時熒光定量PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）
利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產物量的變化,，通過Ct值和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。
閾值：是循環(huán)開始3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍,，設定在擴增曲線指數(shù)增長期,。
C(t)值：熒光信號（擴增產物）到達閾值時所經過的擴增循環(huán)次數(shù)。