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生物分子類實驗室常用實驗技術原理匯總-3
閱讀：612 發(fā)布時間：2014-12-8七,、噬菌體展示技術
噬菌體展示技術是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構基因的適當位置,，使外源基因隨外殼蛋白的表達而表達，同時,外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術,。
噬菌體展示技術是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構基因的適當位置,，在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下，使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達，融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面,。被展示的多肽或蛋白可以保持相對獨立的空間結(jié)構和生物活性,，以利于靶分子的識別和結(jié)合。肽庫與固相上的靶蛋白分子經(jīng)過一定時間孵育后,，洗去未結(jié)合的游離噬菌體,，然后以競爭受體或酸洗脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體,，洗脫的噬菌體感染宿主細胞后經(jīng)繁殖擴增,，進行下一輪洗脫，經(jīng)過3輪～5輪的“吸附-洗脫-擴增”后,，與靶分子特異結(jié)合的噬菌體得到高度富集,。所得的噬菌體制劑可用來做進一步富集有期望結(jié)合特性的目標噬菌體。
八,、RNA提?。═rizol法）
Trizol試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞,，促使核蛋白體的解離,，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中,。當加入氯仿時,，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相,，離心后可形成水相層和有機層,，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層（無色）主要為RNA,，有機層（黃色）主要為DNA和蛋白質(zhì),。