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血清使用說明
閱讀：559 發(fā)布時間：2014-11-12胎牛血清與小牛血清 : 某些細胞必需胎牛血清才能生長,，而有些細胞只需小牛血清即可。
儲存條件 : 血清一般儲存于－20℃,，同時應(yīng)避免反復(fù)凍融,。若存放于4℃時，請勿超過一個月,。
血清中絮狀沉淀的處理 : 沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,，這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì),。 離心血清（400g,，1-2分鐘）或簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里,。 大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解,。 一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾。
使用濃度: 一般為5－20％,，zui常用是10％,。過多血清容易使培養(yǎng)中的細胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系,，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
解凍方法: 血清從冰箱取出后應(yīng)慢慢地解凍,。在4℃低溫冰箱里放置一天或直到*融化為止,。如果時間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法：
1. 將血清從冰箱里取出后，在室溫下放置15-20分鐘,。
2. 然后將血清放置在37℃水浴槽里,。過高溫度會導致血清出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子,。
3. 每隔5分鐘左右適當搖晃瓶子,，直到*地解凍為止。
熱滅活方法 : 加熱可以滅活補體系統(tǒng),。激活的補體參與溶解細胞事件,，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細胞和巨噬細胞,。
在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞,、平滑肌細胞時,，推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,，請遵守56℃,，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻,。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要，可以無須做此步驟,。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍,。
2. 在血清解凍時，將一個容器裝入適量的水,，用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內(nèi)水的溫度,。容器大小、質(zhì)地和裝水的量與裝血清的瓶子相同或相似,。
3. 待血清*解凍時,，將含有血清的瓶子放在預(yù)熱的56℃水浴里,，不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子，以免導致污染,。
4. 在開始加熱處理時,，要及時使用溫度計測定模擬瓶內(nèi)水的溫度。
5. 在預(yù)熱期間,，每隔3-5分鐘要適當搖晃含有血清和水的瓶子,，確保瓶內(nèi)液體均勻加熱。
6. 一旦模擬瓶內(nèi)的水溫達到55.8±0.5℃時,，開始計時,，并在此溫度范圍內(nèi)熱處理30分鐘，然后立即放在冰上冷卻,。
為防止在熱處理過程中由蛋白質(zhì)變性而導致的渾濁和沉淀現(xiàn)象,，熱處理時應(yīng)注意下 列事項：
1. 不要用高于25℃以上的溫度加快解凍速度。
2. 在熱處理之前,，要使血清*融解,。
3. 不要使熱處理的溫度高于56.3℃ 4. 熱處理時間不要長于30分鐘。
5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清,。
避免事項: 避免反復(fù)凍融 長時間儲存在2－8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。 避免產(chǎn)生沉淀 解凍血清時,，請隨時將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生,。
血清分裝時,，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一,。 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀,。 勿將血清置于37℃太久,，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,，從而影響血清的品質(zhì),。
建議事項: 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解,。（100U/mL青霉素；100µg/mL鏈霉素）
500ml血清分裝過程：
準備滅菌的血清瓶 慢慢解凍，zui后放在室溫平衡下溫度,。 滅活 水浴鍋,，56℃，30分鐘,，并且隨時搖晃均勻,。取出，立即放在冰上冷卻|自然冷卻至室溫（約需1-3小時）,。在熱滅活過程中,，定時適當搖動可以減少沉淀現(xiàn)象的發(fā)生。 無菌分裝 轉(zhuǎn)入無菌間,，在超凈臺內(nèi)將血清分裝入50-100ml血清瓶中（注意預(yù)先要將血清輕輕搖動數(shù)周,、混勻；用吸液管吹出血清時要注意：不要吹出氣泡（血清很粘稠,，很容易產(chǎn)生氣泡；如果產(chǎn)生氣泡,，則在酒精燈火焰上過一下）封口,，并于-20℃保存?zhèn)溆谩?nbsp; 使用前融化，置于4℃融化,。若一次無法用完一瓶,，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。