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血清使用說(shuō)明
閱讀：591 發(fā)布時(shí)間：2014-11-12胎牛血清與小牛血清 : 某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。
儲(chǔ)存條件 : 血清一般儲(chǔ)存于－20℃,，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融,。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月,。
血清中絮狀沉淀的處理 : 沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,，這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì),。 離心血清（400g，1-2分鐘）或簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里,。 大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解,。 一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾,。
使用濃度: 一般為5－20％,，zui常用是10％。過(guò)多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化,，特別是一些二倍體的無(wú)限細(xì)胞系,，迅速生長(zhǎng)之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。
解凍方法: 血清從冰箱取出后應(yīng)慢慢地解凍,。在4℃低溫冰箱里放置一天或直到*融化為止,。如果時(shí)間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法：
1. 將血清從冰箱里取出后，在室溫下放置15-20分鐘,。
2. 然后將血清放置在37℃水浴槽里,。過(guò)高溫度會(huì)導(dǎo)致血清出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子,。
3. 每隔5分鐘左右適當(dāng)搖晃瓶子,，直到*地解凍為止,。
熱滅活方法 : 加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
在免疫學(xué)研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,，若非必要,，可以無(wú)須做此步驟。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍,。
2. 在血清解凍時(shí),，將一個(gè)容器裝入適量的水,，用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過(guò)程中檢測(cè)瓶?jī)?nèi)水的溫度,。容器大小,、質(zhì)地和裝水的量與裝血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清*解凍時(shí),，將含有血清的瓶子放在預(yù)熱的56℃水浴里,，不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子，以免導(dǎo)致污染,。
4. 在開始加熱處理時(shí),，要及時(shí)使用溫度計(jì)測(cè)定模擬瓶?jī)?nèi)水的溫度。
5. 在預(yù)熱期間,，每隔3-5分鐘要適當(dāng)搖晃含有血清和水的瓶子,，確保瓶?jī)?nèi)液體均勻加熱,。
6. 一旦模擬瓶?jī)?nèi)的水溫達(dá)到55.8±0.5℃時(shí)，開始計(jì)時(shí),，并在此溫度范圍內(nèi)熱處理30分鐘，然后立即放在冰上冷卻,。
為防止在熱處理過(guò)程中由蛋白質(zhì)變性而導(dǎo)致的渾濁和沉淀現(xiàn)象，熱處理時(shí)應(yīng)注意下 列事項(xiàng)：
1. 不要用高于25℃以上的溫度加快解凍速度,。
2. 在熱處理之前，要使血清*融解,。
3. 不要使熱處理的溫度高于56.3℃ 4. 熱處理時(shí)間不要長(zhǎng)于30分鐘。
5. 在加熱過(guò)程中一定要定時(shí)搖動(dòng)血清,。
避免事項(xiàng): 避免反復(fù)凍融 長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2－8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。 避免產(chǎn)生沉淀 解凍血清時(shí),，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。
血清分裝時(shí),，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡）,，使溫度與成分均一。 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,，因溫度改變太大,，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。 勿將血清置于37℃太久,，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,，從而影響血清的品質(zhì)。
建議事項(xiàng): 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解,。（100U/mL青霉素；100µg/mL鏈霉素）
500ml血清分裝過(guò)程：
準(zhǔn)備滅菌的血清瓶 慢慢解凍,，zui后放在室溫平衡下溫度,。 滅活 水浴鍋,，56℃,，30分鐘，并且隨時(shí)搖晃均勻,。取出,，立即放在冰上冷卻|自然冷卻至室溫（約需1-3小時(shí)）。在熱滅活過(guò)程中,，定時(shí)適當(dāng)搖動(dòng)可以減少沉淀現(xiàn)象的發(fā)生,。 無(wú)菌分裝 轉(zhuǎn)入無(wú)菌間,，在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入50-100ml血清瓶中（注意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻,；用吸液管吹出血清時(shí)要注意：不要吹出氣泡（血清很粘稠，很容易產(chǎn)生氣泡,；如果產(chǎn)生氣泡,，則在酒精燈火焰上過(guò)一下）封口，并于-20℃保存?zhèn)溆谩?nbsp; 使用前融化,，置于4℃融化,。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。