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Temsirolimus

MCE 國(guó)際站：Temsirolimus

品牌：MedChemExpress (MCE)

CAS：162635-04-3

純度：0.9857

貨號(hào)：HY-50910

中文名稱(chēng)：替西羅莫司

Synonyms：替西羅莫司; CCI-779

存儲(chǔ)條件：4°C,，避光,，氮?dú)獗４?*溶劑中：-80°C，1 年,；-20°C,，6 個(gè)月（避光，氮?dú)獗４妫?/p>

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫,；其他地方可能有所不同,。

產(chǎn)品活性：Temsirolimus 是 mTOR 抑制劑，IC50 值為 1.76 μM,。Temsirolimus 能激活自噬 (autophagy),在動(dòng)物模型中防止心臟功能惡化,。

體外：Temsirolimus 有效抑制 mTOR 激酶活性，IC50 為 1.76 μM,，類(lèi)似于 Rapamycin 在沒(méi)有 FKBP12 的情況下 IC50 為 1.74 μM,。Temsirolimus (10 nM 至 mTOR 信號(hào)。微摩爾而不是納摩爾濃度 (20 μM) 的 Temsirolimus 處理導(dǎo)致整體蛋白質(zhì)合成和多核糖體分解的顯著下降,，同時(shí)翻譯延伸因子 eEF2 和翻譯起始因子 eIF2A 的磷酸化迅速增加[1],。Temsirolimus 抑制核糖體蛋白 S6 的磷酸化，在 PTEN 陽(yáng)性 DU145 細(xì)胞中比在 PTEN 陰性 PC-3 細(xì)胞中更有效,，并以濃度依賴(lài)性方式抑制兩種細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)和克隆形成存活[2],。Temsirolimus (100 ng/mL) 有效抑制原代人淋巴細(xì)胞白血病 (ALL) 細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[3],。 MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性,。僅供參考。

體內(nèi)：CCI-779 (20 mg/kg,，腹腔注射) 抑制兩種前列腺癌異種移植物的生長(zhǎng),，PC-3 腫瘤的生長(zhǎng)以劑量依賴(lài)性方式受到抑制，并且生長(zhǎng)抑制作用大于 DU145 腫瘤[2],。在具有人 ALL 的 NOD/SCID 異種移植模型中,，10 mg/kg/天的 Temsirolimus 處理導(dǎo)致外周血母細(xì)胞減少和脾腫大[3]。與對(duì)照組相比,，Temsirolimus (20 mg/kg,，ip 5 天/周) 給藥后 1 周后 DAOY 異種移植物的生長(zhǎng)顯著延遲 160%，2 周后延遲 240%,。單次大劑量 Temsirolimus (100 mg/kg,，ip) 處理可在 1 周內(nèi)誘導(dǎo) 37% 的腫瘤體積消退。Temsirolimus 處理 2 周還將耐雷帕霉素 U251 異種移植物的生長(zhǎng)延遲了 148%[4],。在亨廷頓病小鼠模型中,，Temsirolimus 對(duì) mTOR 的抑制可提高四種不同行為任務(wù)的表現(xiàn)并減少聚集體形成[5]。給藥 Temsirolimus 可誘導(dǎo)顯著的劑量依賴(lài)性抗腫瘤反應(yīng),，對(duì)抗 8226,、OPM-2 和 U266 異種移植物的皮下生長(zhǎng)，8226 和 OPM-2 的 ED50 分別為 20 mg/kg 和 2 mg/kg,，它們分別與抑制增殖和血管生成,、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和縮小腫瘤細(xì)胞大小有關(guān)[6],。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：為了生成異種移植，將細(xì)胞植入基質(zhì)膠中,；基質(zhì)膠儲(chǔ)存在 ?20°C 下,，然后在使用前在 4°C 的冰上解凍 3 小時(shí)。將細(xì)胞輕輕懸浮在 1 mL PBS 中,，并在冰上孵育 5 分鐘,。使用預(yù)冷的移液器將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有 1 mL 基質(zhì)膠的管中，并將細(xì)胞濃度調(diào)整為 3×107/mL,。使用 25 號(hào)針頭將細(xì)胞（0.1 mL 中 3×106）皮下注射到小鼠的兩側(cè),。當(dāng)異種移植長(zhǎng)到直徑約 5 毫米時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)分成 10 只小鼠組,。進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：攜帶 PC-3 腫瘤的小鼠每周 3 或 5 天接受 CCI-779（每天每公斤 1,、5、10 和 20 毫克）或載體溶液治療,，持續(xù) 3 周,。 DU145 腫瘤小鼠僅接受 CCI-779（20 mg/kg/天）或載體溶液治療 3 周。PC-3 腫瘤小鼠接受以下治療：(a) 對(duì)照,，CCI-779 載體溶液,；(b) 單獨(dú)化療，每周腹腔注射米托蒽醌 1.5 mg/kg 或多西他賽 10 mg/kg,，共 3 次,；(c) 單獨(dú) CCI-779，每天腹腔注射 5 或 10 mg/kg,，每周 3 次,，共 3 周；(4) 化療后接受 CCI-779,。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性,。它們僅供參考。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：集落形成試驗(yàn)還用于確定前列腺癌細(xì)胞在接受各種治療后的存活率,。將呈指數(shù)增長(zhǎng)的細(xì)胞暴露于不同劑量的米托蒽醌或多西他賽 24 小時(shí),，或暴露于 CCI-779 3 天。處理后,，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和胰蛋白酶消化,。將連續(xù)稀釋的細(xì)胞接種到 6 孔板中的 5 mL 培養(yǎng)基中。將培養(yǎng)板在 37°C 下,、濕度為 90% 且含有 5% CO2 的空氣中孵育 10 天,。然后用亞甲藍(lán)對(duì)培養(yǎng)板進(jìn)行染色，并計(jì)數(shù)含有 >50 個(gè)細(xì)胞的集落。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性,。它們僅供參考,。

激酶實(shí)驗(yàn)：將 Flag 標(biāo)記的野生型人類(lèi) mTOR (Flag-mTOR) DNA 構(gòu)建體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到 HEK293 細(xì)胞中。48 小時(shí)后進(jìn)行 Flag-mTOR 的蛋白質(zhì)提取和純化,。在 96 孔板中,，在不同濃度的不含 FKBP12 的 Temsirolimus 存在下對(duì)純化的 Flag-mTOR 進(jìn)行體外激酶測(cè)定，并使用 His6-S6K1 作為底物通過(guò)解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫測(cè)定 (DELFIA) 進(jìn)行檢測(cè),。首先將酶稀釋在激酶測(cè)定緩沖液中（10 mM Hepes（pH 7.4）,、50 mM NaCl、50 mM β-甘油磷酸,、10 mM MnCl2,、0.5 mM DTT、0.25 μM 微囊藻毒素 LR 和 100 μg/mL BSA）,。將 12 μL 稀釋酶與 0.5 μL Temsirolimus 短暫混合到每個(gè)孔中,。通過(guò)添加 12.5 μL 含有 ATP 和 His6-S6K 的激酶分析緩沖液來(lái)啟動(dòng)激酶反應(yīng)，最終反應(yīng)體積為 25 μL,，其中含有 800 ng/mL FLAG-mTOR,、100 μM ATP 和 1.25 μM His6-S6K。將反應(yīng)板在室溫下輕輕搖動(dòng)孵育 2 小時(shí)（1-6 小時(shí)呈線(xiàn)性）,，然后通過(guò)添加 25 μL 終止緩沖液（20 mM Hepes（pH 7.4）,、20 mM EDTA 和 20 mM EGTA）來(lái)終止反應(yīng)。在室溫下使用標(biāo)記有銪-N1-ITC (Eu) 的單克隆抗 P(T389)-p70S6K 抗體（每個(gè)抗體 10.4 Eu）對(duì)磷酸化 (Thr-389) His6-S6K 進(jìn)行 DELFIA 檢測(cè),。將 45 μL 終止激酶反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到含有 55 μL PBS 的 MaxiSorp 板中,。讓 His6-S6K 附著 2 小時(shí)，然后抽吸孔并用 PBS 清洗一次,。加入 100 μL 含有 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K 抗體的 DELFIA 緩沖液。在輕輕攪拌下繼續(xù)抗體結(jié)合 1 小時(shí),。然后抽吸孔并用含有 0.05% Tween 20 (PBST) 的 PBS 清洗四次,。每孔加入 100 μL DELFIA 增強(qiáng)溶液，然后使用 PerkinElmer Victor 型號(hào)的讀板機(jī)讀取板內(nèi)數(shù)據(jù),。MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性,。僅供參考。

IC50 & Target：mTOR 1.76 μM (IC50)

銷(xiāo)售產(chǎn)品：L-Homopropargylglycine  | Carubicin (hydrochloride)  | Tempo  | SBI-553  | Copper tripeptide  | Fomc-Gly-Gly-Phe-Gly-OH  | Sphingomyelin  | TSQ  | Meloxicam  | Mitoxantrone (dihydrochloride)

Trending products：Recombinant Proteins  |  Bioactive Screening Libraries  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Isotope-Labeled Compounds  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Shor B, et al. A new pharmacologic action of CCI-779 involves FKBP12-independent inhibition of mTOR kinase activity and profound repression of global protein synthesis. Cancer Res, 2008, 68(8), 2934-2943.[2]. Wu L, et al. Effects of the mammalian target of rapamycin inhibitor CCI-779 used alone or with chemotherapy on human prostate cancer cells and xenografts. Cancer Res, 2005, 65(7), 2825-2831.[3]. Teachey DT, et al. The mTOR inhibitor CCI-779 induces apoptosis and inhibits growth in preclinical models of primary adult human ALL. Blood, 2006, 107(3), 1149-1155.[4]. Geoerger B, et al. Antitumor activity of the rapamycin analog CCI-779 in human primitive neuroectodermal tumor/medulloblastoma models as single agent and in combination chemotherapy. Cancer Res, 2001, 61(4), 1527-1532.[5]. Ravikumar B, et al. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nat Genet. 2004 Jun;36(6):585-95. Epub 2004 May 16.[6]. Frost P, et al. In vivo antitumor effects of the mTOR inhibitor CCI-779 against human multiple myeloma cells in a xenograft model. Blood. 2004 Dec 15;104(13):4181-7. Epub 2004 Aug 10.[7]. Dela Cruz FS, et al. A case study of an integrative genomic and experimental therapeutic approach for rare tumors: identification of vulnerabilities in a pediatric poorly differentiated carcinoma. Genome Med. 2016 Oct 31;8(1):116.[8]. Jason C. Choi, et al. Temsirolimus activates autophagy and ameliorates cardiomyopathy caused by lamin A/C gene mutation. Sci Transl Med. 2012 Jul 25; 4(144): 144ra102.