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Anti-Flag 親和凝膠

MCE 國際站：Anti-Flag Affinity Gel

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K0217

中文名稱：Anti-Flag 親和凝膠

存儲條件：-20℃, 2 年

產(chǎn)品活性：MCE Anti-Flag 親和凝膠用于細菌和哺乳動物細胞裂解物以及體外表達系統(tǒng)中 Flag 標簽蛋白的免疫沉淀、蛋白純化實驗,。

生物活性：MCE Anti-Flag 親和凝膠是由高質(zhì)量的鼠源 lgG2b 單克隆抗體與瓊脂糖 Sepharose 4B 共價偶聯(lián)而得,，具有較高的 Flag (DYKDDDDK) 標簽融合蛋白結(jié)合容量 (>1.1 mg 蛋白/mL)，可用于細菌和哺乳動物細胞裂解物以及體外表達系統(tǒng)中 Flag 標簽蛋白的免疫沉淀 (IP) 實驗,。 特點： 1. 方便省時 2. 非特異性結(jié)合低 3. 樣品損失少 4. 載量 > 1.1 mg/mL. 本產(chǎn)品的規(guī)格與實際凝膠體積一致,，凝膠含量為 50%。

操作流程：1. 凝膠預(yù)處理 1.1 將 Anti-Flag 親和凝膠重懸混勻,，吸取 10 μL 凝膠懸液 (約 5 μL 凝膠) 至干凈的 1.5 mL 離心管,。1.2 加入 600 μL 洗滌緩沖液,，混合均勻，10,000 rpm 離心 30 秒,，棄去上清,。重復 3-4 次。 注：小心吸取上清,，避免凝膠損失,。2. 樣品的結(jié)合2.1 在上述清洗干凈的凝膠中加入 500 μL 細胞裂解液。充分混勻后,，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育,，4℃ 孵育 2 小時 (如需提高結(jié)合效率，可延長至過夜),。2.2 10,000 rpm 離心 30 秒,，將上清轉(zhuǎn)移至新離心管 (上清液可用于檢測 Flag 標簽蛋白是否有殘留)。3. 洗滌在上述分離得到的凝膠中加入 500 μL 洗滌緩沖液,，充分混懸凝膠,，10,000 rpm 離心 30 秒，棄去上清,。重復以上洗滌步驟 3 次以上，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于 0.05 為止,。注意：如上清液的 OD280 大于 0.05,，適當增加洗滌次數(shù)即可。4. 洗脫本說明書提供三種 Flag 標簽蛋白洗脫方案,，操作者可根據(jù)需要選擇不同的洗脫方案,。4.1 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer,，充分混勻后煮沸 5 分鐘,。10,000 rpm 離心 30 秒，取 4 μL 上清液進行 SDS-PAGE 檢測,。4.2 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析。步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 50 μL 洗脫緩沖液 A,，充分混勻后室溫孵育 10 分鐘,。10,000 rpm 離心 30 秒，收集上清,。按照每 50 μL 洗脫液加入 25 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液,，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品可用于后期功能分析,。4.3 競爭性洗脫：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性,，可用于后期功能分析,。 步驟：在上述洗滌干凈的凝膠中加入 30-50 μL 洗脫緩沖液 B。充分混勻后,，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育,，室溫孵育 1 小時或 4℃ 孵育 2 小時。10,000 rpm 離心 30 秒,，收集上清,，即得目的蛋白，樣品可用于后期功能分析,。

熱銷產(chǎn)品：Dacinostat  | KH-4-43  | 3'-Hydroxypterostilbene  | Posaconazole  | GW 501516  | Gambogic Acid  | Streptomycin  | Gastrodin  | eGFP mRNA-LNP  | Bococizumab

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