Cell Counting Kit-8是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)的試劑盒,。其核心成分是水溶性四唑鹽，在細(xì)胞存活狀態(tài)下,，可以被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶還原為橙黃色的水溶性甲臜產(chǎn)物,。通過測(cè)定甲臜產(chǎn)物的吸光度，可以間接反映細(xì)胞的存活情況和增殖能力。
一,、工作原理
Cell Counting Kit-8的工作原理基于顏色變化,。WST-8是一種類似于MTT（四唑鹽）的水溶性化合物，但其毒性更低,，更適合用于細(xì)胞活性檢測(cè),。在細(xì)胞存活狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶可以將WST-8還原為橙黃色的甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。甲臜產(chǎn)物的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，因此可以通過測(cè)定甲臜產(chǎn)物的吸光度來評(píng)估細(xì)胞的存活情況和增殖能力。
具體步驟如下：
細(xì)胞接種
將待測(cè)細(xì)胞接種到96孔板中,，每孔加入一定數(shù)量的細(xì)胞,。
加入Cell Counting Kit-8試劑
在細(xì)胞培養(yǎng)一定時(shí)間后，向每孔中加入適量的試劑,?？梢灾苯蛹尤氲郊?xì)胞培養(yǎng)基中，無需去除原有的培養(yǎng)基,。
測(cè)量吸光度
使用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔中甲臜產(chǎn)物的吸光度,。吸光度的大小與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，從而可以計(jì)算出細(xì)胞的存活率和增殖能力,。
二,、應(yīng)用領(lǐng)域
細(xì)胞增殖檢測(cè)
廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力，適用于各種類型的細(xì)胞,，包括腫瘤細(xì)胞,、原代細(xì)胞和干細(xì)胞等。
細(xì)胞毒性檢測(cè)
可以用于評(píng)估藥物,、化學(xué)物質(zhì)和其他因素對(duì)細(xì)胞的毒性作用,。通過比較處理組和對(duì)照組的吸光度，可以計(jì)算出細(xì)胞的存活率和毒性指數(shù),。
藥物篩選
在高通量藥物篩選中具有重要應(yīng)用,，可以快速評(píng)估大量化合物對(duì)細(xì)胞的影響，幫助研究人員篩選出具有潛在治療價(jià)值的候選藥物,。
疾病研究
可用于研究疾病的發(fā)生機(jī)制和進(jìn)展,，例如腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)退行性疾病等,。
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