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人結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒

MCE 國際站：Human Colonic Organoid Kit

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) & Supplement D (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.

簡介：MCE 人結(jié)腸類器官培養(yǎng)試劑盒包含結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B(50x),，培養(yǎng)添加物 C (250x) 和培養(yǎng)添加 D (250x)。該產(chǎn)品可有效構(gòu)建人結(jié)腸類器官,。

概述：MCE 人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)試劑盒包含人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A,、培養(yǎng)添加物 B (50x)、培養(yǎng)添加物 C (250x) 和培養(yǎng)添加 D (250x),。該產(chǎn)品可用于有效構(gòu)建人結(jié)直腸類器官,。腸道隱窩底部存在的干細(xì)胞及其祖細(xì)胞具有自我更新和分化成各種腸道細(xì)胞類型的能力，以確保類器官的持續(xù)生長和維持,，模擬真實結(jié)直腸組織的特征,。人結(jié)直腸類器官對于研究結(jié)直腸發(fā)育、疾病機制和藥物篩選具有重要意義

描述：

•   MCE 人體結(jié)腸類器官試劑盒包含人體結(jié)腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基A,、人體結(jié)腸類器官添加物B（50x）,、人體結(jié)腸類器官添加物C（250x）和人體結(jié)腸類器官添加物D（250x），本產(chǎn)品可用于高效構(gòu)建人體結(jié)腸類器官,。

•   干細(xì)胞和祖細(xì)胞位于腸粘膜隱窩底部,，具有自我更新和分化成各種成熟細(xì)胞的能力。來自原代組織的結(jié)腸類器官具有自我更新能力,，模仿真實結(jié)腸組織的特征,。結(jié)腸類器官可用于研究結(jié)腸發(fā)育、疾病機制和藥物篩選,。

操作說明：1. 配制人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基冰上解凍人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)添加物 B,、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)添加物 C、人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)添加物 D,，按下列組分配制人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基,，充分混勻后置于冰上備用。a. 按下列組分配制人結(jié)直腸類器官擴增培養(yǎng)基,，專門用于原代培養(yǎng)和復(fù)蘇,。充分混勻后置于冰上備用2. 提取原代組織細(xì)胞a. 使用預(yù)冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代人結(jié)直腸組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存,。b. 在保證無菌條件下,，推薦使用含有 500 μg/mL BSA 的結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人結(jié)直腸組織，然后在細(xì)胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為 2 mm 的碎片,，隨后轉(zhuǎn)移至含有 10 mL 預(yù)冷的 PBS 的 15 mL 錐形管中,。c. 取適量結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養(yǎng)基,，在后續(xù)步驟中，使用 10% FBS 培養(yǎng)基潤洗 10 mL 移液管的內(nèi)表面以避免組織粘在移液管壁上,。d. 用 10 mL 移液管清洗樣品樣本至少 10 次,。靜置錐形管使樣品沉淀在底部，用 10 mL 移液管吸去上清,，加入預(yù)冷 10 mL FBS,。重復(fù)該步驟 3-5 次直到上清沒有碎屑。e. 往管中加入 10 mL 預(yù)冷的組織消化液,，放在搖床上在 4°C 下輕輕搖晃 40 分鐘,。f. 一旦隱窩結(jié)構(gòu)出現(xiàn)，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化,，然后使用 100 μm 的細(xì)胞過濾網(wǎng)進行過濾,，收集過濾液。g. 在 4°C 下以 250 g 離心過濾液 3 分鐘收集細(xì)胞沉淀,。隨后將細(xì)胞重懸于人結(jié)直腸類器官培養(yǎng)基 A 中,，重復(fù)此前離心步驟 1-2 次以收集細(xì)胞沉淀。3. 構(gòu)建類器官a. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質(zhì)膠中,，推薦重懸密度為 5-20 個隱窩/μL,。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞，如需稀釋,，請確?；|(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 使用預(yù)先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭,，然后將基質(zhì)膠與細(xì)胞混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部,，盡量避免產(chǎn)生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液,。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固。c. 待基質(zhì)膠凝固后,，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人結(jié)直腸類器官擴增培養(yǎng)基,，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu),，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C,，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。d. 密切關(guān)注類器官生長狀態(tài),，每隔 3-4 天更換一次培養(yǎng)基,。一般情況下，5-8 天可觀察到人結(jié)直腸類器官生成,。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基,，向孔中加入 500 μL 預(yù)冷人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A,，使用細(xì)胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi)容物剝離出培養(yǎng)板并轉(zhuǎn)移至 1.5 mL EP 管內(nèi)。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質(zhì)膠分離,，200-250 g 離心 3 分鐘收集沉淀,。隨后加入 1 mL 人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進行充分吹打，使類器官分散為碎片,。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0.5 mL 的類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化 2 分鐘后加入 5 倍消化液體積的人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 終止消化,。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢,，棄上清,，用人結(jié)直腸類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的隱窩重懸于基質(zhì)膠中,，推薦重懸密度為 5-20 個隱窩/μL,。重懸后盡快進行鋪板。建議使用基質(zhì)膠原液重懸腫瘤細(xì)胞,，如需稀釋,，請確保基質(zhì)膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1,。e. 使用預(yù)先濕潤的 200 μL 移液槍槍頭,，然后將基質(zhì)膠與細(xì)胞混懸液迅速注入 24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產(chǎn)生氣泡,，每孔注入 25-35 μL 混懸液,。隨后將細(xì)胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘直至凝固,。f. 待基質(zhì)膠凝固后,，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預(yù)熱的人結(jié)直腸類器官穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結(jié)構(gòu),，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回 37°C,，5% CO2的培養(yǎng)箱中。g. 密切關(guān)注類器官的生長狀態(tài),，記錄多個視野中的結(jié)直腸類器官的形態(tài)和分布,。

注意事項：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細(xì)胞時需保持全程無菌,，避免造成后續(xù)實驗污染,。3. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態(tài)，出現(xiàn)小細(xì)胞團（10-50 個細(xì)胞）時應(yīng)終止消化,，避免時間過長影響類器官后續(xù)生長活力,。4. 基質(zhì)膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細(xì)胞重懸后應(yīng)將其迅速注入細(xì)胞培養(yǎng)孔內(nèi),，盡量避免產(chǎn)生氣泡,。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作

銷售產(chǎn)品：Vitamin K5 (hydrochloride)  | HJB97  | 2′,7′-Dichlorofluorescein diacetate  | AI-10-47  | Loratadine  | Siramesine (hydrochloride)  | Caspase-8 Antibody  | Bepridil hydrochloride  | EC23  | Thymine

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